[发明专利]一种前列腺特异性抗原检测的光致电化学传感器的构建

权利要求书

1.一种前列腺特异性抗原检测的光致电化学传感器的构建方法，其特征是包含以下步骤：

（1）通过阳极氧化的方法在钛片上刻蚀并煅烧制备锐钛矿二氧化钛纳米管电极；

（2）步骤（1）中得到的二氧化钛纳米管电极依次浸泡在CdTe QDs溶液和1 % 聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液中并用超纯水清洗，重复4次；

（3）将50 μL PSA特异性识别肽CEHSSKLQK溶液滴加到步骤（2）形成的电极上并在4 ℃条件下孵育8 h, 超纯水清洗后用巯基己醇封闭活性位点；

（4）将步骤（3）修饰的电极浸入1 μmol/L R1溶液中，在4 ℃条件下孵育8 h，超纯水清洗，之后将电极依次浸入到R2，H1，H2溶液中形成双链DNA，其中R1序列为tattaactttactcc，R2序列为tcagcggggaggaagggagtaaagttaata，H1序列为cttcctccccgctgacaaagttcagcgggg，H2序列为tcagcggggaggaagccccgctgaactttg；

（5）将步骤（4）中得到的电极浸泡在阿霉素-CuS（Dox-CuS）溶液中，在4 ℃条件下反应7h，超纯水清洗；

（6）将步骤（5）中得到的电极浸泡在不同浓度PSA溶液或者实际样品中，在4 ℃条件下孵育45 min，超纯水清洗，置于含有0.1 mol/L抗坏血酸（AA）的pH 7.4的0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，测量其光电流强度，建立起PSA浓度与光电流强度的关系。

2.根据权利要求1所述的一种前列腺特异性抗原检测的光致电化学传感器的构建方法，其特征在于：步骤（1）中，所述二氧化钛纳米管电极制备方法：依次用丙酮、乙醇和超纯水中超声清洗钛片各10 min，钛片作为阳极，石墨片作为阴极，包含0.3 wt % NH₄F和2.0vol %水的乙二醇作为电解质溶液，外加恒电压为40 V的条件下氧化2 h，取出钛片并用超纯水清洗，干燥后得到无定型的二氧化钛，在450 ℃条件下煅烧2 h后冷却到室温得到锐钛矿二氧化钛纳米管，二氧化钛纳米管电极的工作区域面积为1cm×1cm。

3.根据权利要求1所述的一种前列腺特异性抗原检测的光致电化学传感器的构建方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的CdTe负载到二氧化钛纳米管表面方法：将120 mL 5mmol/L的CdCl₂溶液和90 μL巯基丙酸溶液依次加入三颈烧瓶中，用1.0 mol/L的NaOH调节溶液的pH至11.8，在N₂保护下反应30 min，将120 mg NaBH₄ 和60 mg Na₂TeO₃相继加入三颈烧瓶，混合溶液加热到100 °C，N₂保护下回流3 h即可获得CdTe量子点，然后用7000 r/min转速下的离心机离心15 min，重复三次，将得到的沉淀重新分散在超纯水中，将二氧化钛纳米管电极依次浸泡在CdTe溶液和1 %聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液中各10分钟后并用超纯水清洗，重复这一过程四次后得到CdTe/TiO₂电极。

4.根据权利要求1所述的一种前列腺特异性抗原检测的光致电化学传感器的构建方法，其特征在于：步骤（3）中，将1 mg PSA特异性识别肽溶解在1 mL的pH 7.4磷酸缓冲液中，加入20 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和10 mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），混匀后将步骤（2）得到的电极浸入上述溶液中，在4 ℃条件下孵育8 h，超纯水清洗，再浸入1 mmol/L的巯基己醇溶液中，孵育2 h，超纯水清洗。