[发明专利]氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂及应用

权利要求书

1.氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述试剂采用如下方法进行制备：将对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素分别具有高特异性和高亲和性的适配体作为其信息识别试剂，分别与作为其信息传导试剂的3种具有相同内核材料及不同发射波长的量子点QD1、QD2和QD3偶联，将该3种偶联物混合后加入氧化石墨烯，通过将该3种偶联物分别与氧化石墨烯GO构成荧光共振能量转移系统，制备出对卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留进行同时快速荧光检测的试剂；所述量子点QD1、QD2和QD3分别是以巯基乙酸、巯基丙酸和巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长分别为548、580和668nm；对卡那霉素具有高特异性和高亲和性的适配体KAPT的核酸序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CCC GCA ATA AGA TTG GCG TAG TCT CTT ACG CAC TGATAG TGC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，对奈替米星具有高特异性和高亲和性的适配体NAPT的核酸序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CCA TGA CGC ATGTCG AAG CTT GGC GGC AGA CGT CCT TAG CTC TGC GGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'，对妥布霉素具有高特异性和高亲和性的适配体TAPT的核酸序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TAG GGA ATTCGT CGA CGG ATC CAT CCT CGC TGA TGG GGG AGT TGC TAC CGG CCA TTC GTA TTC TGCGGC GCA TGC GTC GAC CTG-3'。

2.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述试剂制备方法的具体步骤如下：

量取浓度分别为21.11μmol/L、13.09μmol/L和6.01μmol/L的QD1、QD2和QD3各5μL，分别加入浓度为10g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐10μL，用去离子水定容至40μL，分别进行活化；然后分别加入经变性处理的KAPT、NAPT和TAPT，用pH7.4的磷酸盐缓冲液定容至400μL，进行偶联反应；将反应后溶液分别用50kD超滤管过滤，管中留存溶液分别用磷酸盐缓冲液定容至100μL，此KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3偶联物溶液构成卡那霉素、奈替米星和妥布霉素的复合荧光探针溶液，以QD1、QD2和QD3浓度计的偶联物浓度分别为1055.5、654.5和300.5nmol/L；

将适量KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3混合后加入氧化石墨烯(GO)，并用磷酸盐缓冲液稀释至其中GO的浓度为250mg/L，以QD1、QD2和QD3浓度计的KAPT-QD1、NAPT-QD2和TAPT-QD3的浓度分别为105.55nmol/L、65.45nmol/L和30.05nmol/L，猝灭反应30min后即构成可用于卡那霉素、奈替米星和妥布霉素多残留同时快速荧光检测的试剂KAPT-QD1/GO、NAPT-QD2/GO和TAPT-QD3。

3.如权利要求1所述的一种氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于：所述高特异性是指KAPT除卡那霉素外，对包括奈替米星和妥布霉素在内的其它抗生素不具有识别作用，NAPT除奈替米星外，对包括卡那霉素和妥布霉素在内的其它抗生素不具有识别作用，TAPT除妥布霉素外，对包括卡那霉素和奈替米星在内的其它抗生素不具有识别作用；所述高亲和性体现为KAPT对卡那霉素的解离常数为40.25±5.97nmol/L，NAPT对奈替米星的解离常数为51.54±10.43nmol/L，TAPT对妥布霉素的解离常数为52.92±19.09nmol/L。