[发明专利]重组尘螨变应原蛋白药物合剂及其应用

说明书

本发明涉及一种重组尘螨变应原蛋白组合物，其包含重组尘螨Ⅰ型变应原DP1、DF1蛋白和重组尘螨II型变应原DP2、DF2蛋白，并分别按活性比1:1:1:1混合或按质量比(1～5)：(1～20)：(1～10)：(1～20)混合。本发明与现有产品相比：(1)重组变应原具有高纯度、质量可控等优势；(2)重组蛋白具有较好的特异性；(3)与天然提取液相比具有较好的免疫原性，降低发生严重过敏副反应的风险，提高脱敏治疗的效果。其次，本发明的重组变应原组合物不仅比相同比例的天然变应原蛋白具有更好的活性，并且与单一组分相比活性也高于相应天然单一组份，具备有产品开发应用前景。

技术领域

本发明涉及一种治疗尘螨过敏的药物组合，尤其涉及一种改良的重组尘螨变应原蛋白药物合剂及其应用。

背景技术

在引起过敏性疾病的众多变应原中，尘螨是最主要的变应原。尘螨在过敏性疾病患者特异性免疫诊断中阳性率约为70-80％。尘螨种类繁多，广泛存在于人类生活和工作环境中，其排泄物、代谢物及螨体均具有较强的变应原型，据统计全球约10％的人口尘螨过敏，约80％的外源性哮喘由尘螨引起。

目前，临床上主要采用尘螨变应原提取液免疫治疗尘螨过敏，例如2006年上市的浙江我武生物的“畅迪”粉尘螨滴剂即为粉尘螨代谢培养物的提取液；2015年日本上市的Actair屋尘螨舌下片剂，用于治疗屋尘螨(或称为户尘螨)引起的过敏性鼻炎，采用的也是天然I、II型户尘螨和I、II型粉尘螨的四种组分；2017年FDA批准上市的Odactra也是采用天然I、II型户尘螨和I、II型粉尘螨的四种组分，可见采用合剂已经成为尘螨脱敏治疗的一种趋势。

然而由于天然变应原提取液的组成非常复杂，恒定其组分非常困难，且容易受到外源性有毒物质、病原体微生物的污染，影响其重复性与安全性，在治疗过程中长期使用易导致红晕、肿胀、硬结、坏死等局部反应和休克、水肿、支气管痉挛、荨麻疹、血管性水肿、全身性红斑等全身反应，此外，采用粗提液进行诊断，无法明确患者对变应原各组分的反应程度，易致误诊。变应原的质量对变态反应疾病的诊断和治疗至关重要，用于免疫诊治的变应原应该是纯品而不宜为粗提取液，而且尘螨变应原主要存在于排泄物和螨体中，采用提取方法耗时长，过程繁琐，成本较高，无法避免免疫治疗中副反应的发生。

发明内容

为了克服以上缺点，本发明的目的是提供一种重组尘螨变应原蛋白药物合剂，并且针对重组尘螨变应原蛋白药物合剂优化得到一种活性最优的药物合剂配比。

首先，本发明提供了一种重组尘螨变应原蛋白药物合剂，其包含重组尘螨Ⅰ型变应原DP1、DF1蛋白和重组尘螨II型变应原DP2、DF2蛋白，并且四种尘螨变应原蛋白DP1：DP2：DF1：DF2分别按活性比1:1:1:1混合或按质量比(1～5)：(1～20)：(1～10)：(1～20)混合。

优选的，所述重组尘螨变应原蛋白药物合剂中四种尘螨变应原蛋白DP1：DP2：DF1：DF2分别按质量比1：(1～20)：1：(1～20)混合。

更优选的，所述重组尘螨变应原蛋白药物合剂中四种尘螨变应原蛋白按质量比1：5：1：5混合。

优选的，所述重组尘螨Ⅰ型变应原DP1、DF1蛋白和重组尘螨II型变应原DP2、DF2蛋白，分别由如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示的基因通过毕赤酵母表达系统表达得到。

更优选的，所述重组尘螨Ⅰ型变应原蛋白由以下方法制备得到：

1、将上述所述的基因构建到质粒pPICZα上，并转入毕赤酵母X33感受态细胞中，并培养获得宿主单克隆工程菌；2、挑取单克隆工程菌经过高密度发酵，并经离子交换层析、阴离子交换层析、疏水层析的三步纯化得到。