[发明专利]检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法

说明书

本发明公开了一种检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)全场灭鼠；(2)准备试验老鼠；(3)引诱老鼠进入鼠洞觅食；(4)刺激老鼠返回、捕捉老鼠；(5)提取老鼠携带的病毒；(6)病毒检测。本发明方法借助饥饿老鼠的觅食行为，使老鼠进入鼠洞，并利用母鼠哺乳崽鼠的天性或发情期母鼠的交配行为进行刺激或引诱，将老鼠活动范围内中可能存在的非洲猪瘟病原通过接触携带在体表后收集并进行检测，以便判断老鼠生活的猪场环境中是否存在猪瘟病毒，以排除猪场复产时老鼠洞中或猪场环境中可能存在的非瘟病毒对养猪生产造成的不利影响。

技术领域

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒的检测方法，具体涉及一种检测猪场老鼠及其生活环境是否携带非洲猪瘟病毒的方法。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起的一种急性、出血性、烈性传染病，其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，曾在非洲和欧洲国家广泛流行，并造成巨大的经济损失。目前，世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一类动物疫情。

非洲猪瘟自1921年在肯尼亚首次报道，一直存在于撒哈拉以南的非洲国家，并于上世纪60年代传入欧洲，70年代传入南美洲，2007传入高加索地区和俄罗斯。2017年以来，俄罗斯远东地区发生数起非洲猪瘟疫情。2018年我国沈阳市沈北新区沈北街道(新城子)五五社区发现国内首例病毒。截止2018年12月，我国共有22个省份发生87起家猪感染非洲猪瘟疫情、2起野猪感染非洲猪瘟疫情，当前全国非洲猪瘟疫情仍处于点状散发态势，没有出现大面积流行，疫情发生总体可控。由于在世界范围内没有研发出可以有效预防非洲猪瘟的疫苗，因此快速、准确的诊断对防止该病的传播、流行十分重要。

现有技术中，已有大量专利文献公开了猪瘟病毒的检测、诊断技术。如中国专利(申请号201811202113.4)公开一种基于K196R基因的非洲猪瘟病毒检测试剂盒和检测方法。具体的，该技术方案提供了一组新的用于检测非洲猪瘟病毒的QPCR组合物，包括以下引物和与引物配合使用的探针：K196R上游引物为SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；K196R下游引物为SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；探针为SEQIDNo.2所示的核苷酸序列，利用该组合物可以高效快速地检测样品中是否含有非洲猪瘟病毒，且检测的灵敏度高，特异性强。

又如，中国专利(申请号201811112387.4)公开了一种检测非洲猪瘟病毒抗原胶体金免疫层析试纸及制备方法和应用，该胶体金免疫层析试纸包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；其中胶体金垫内有胶体金标记的抗ASFVp30抗原的一个表位的单克隆抗体Mab1；硝酸纤维素膜表面划有检测线和质控线，检测线为针对ASFVp30抗原另一表位的单克隆抗体Mab2，质控线为羊抗小鼠IgG抗体；该技术方案的胶体金免疫层析试纸条具有方便、快速、灵敏和特异等优点，可用于感染ASFV细胞直接检测，适合ASFV感染诊断、流行病学调查和生猪国际贸易检疫检验。

再如，中国专利(申请号201811181479.8)公开了一种非洲猪瘟病毒的检测试剂、试剂盒及其应用。该非洲猪瘟病毒检测试剂包括：引物对，包括序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2，所示的上游引物、下游引物，所述上游引物的5’端标记有第一核酸标记物、下游引物的5’端标记有第二核酸标记物。该技术方案提供的检测非洲猪瘟病毒的方法是以标记的特异性引物扩增适当长度的基因片段，能够保证检测的高度特异性，提高了检测结果的准确性；并且该技术方案提供的检测方法避免了扩增产物稀释和探针杂交等流程，保持了免疫胶体金试纸条技术直观、快速、方便、成熟、廉价等优点。