[发明专利]超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白的方法

说明书

本发明属于食品生物利用领域，涉及超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白的方法；步骤如下：在鱼丸厂中回收下脚料，挑出鱼皮，洗净剪碎冻干后，依次浸泡在NaOH和异丙醇溶液中，除杂蛋白、色素和脂肪；然后，浸泡在乳酸中，放于超声池进行超声酸‑乳酸预处理，再加入胃蛋白酶进行酸酶提取，离心后得到胶原蛋白粗提液，加入NaCl进行盐析，盐析后进行离心，得到沉淀溶解在乙酸溶液中，然后依次使用乙酸溶液和蒸馏水进行透析，经真空冷冻干燥后得到胶原蛋白。本发明主要解决了鱼产品加工生产的下脚料的资源浪费问题，并且克服传统胶原蛋白提取方法提取率低的缺点；本发明透析冻干表征为天然Ⅰ型的胶原蛋白，提取率达到75.8％。

技术领域

本发明属于食品生物利用领域，具体涉及一种超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白的方法。

背景技术

目前，胶原蛋白制备的主要原料是陆生哺乳动物，如猪、牛和鸡的皮或骨，但随着疯牛病、口蹄疫等疾病的爆发和一些宗教的限制，使陆生哺乳动物的胶原蛋白受到安全性质疑和使用限制。相对动物加工和食用习惯而言，水产加工的废弃料较多，更具有资源优势，且水产动物的胶原蛋白更容易受酶、温度、pH等环境条件的影响，即水产胶原蛋白的稳定性相对较低，便于营养、消化、吸收。因而水产动物来源胶原蛋白就成为哺乳动物来源胶原蛋白的理想和现实的替代产品，以水产动物的皮骨为原料提取胶原蛋白成为研究热点。

白鲢鱼是我国四大淡水鱼之一，产量巨大，而在加工过程中，每年近产生17.00万吨的鱼皮等副产物；而这些加工废料中含有大量的胶原蛋白，如果对其提取应用既可以减少环境污染，也可以提高白鲢鱼产品加工的经济效益。

胶原蛋白是一种纤维结构蛋白，是生物体细胞外基质的主要成分。它在维持生物结构的完整性，各种组织的功能方面起着重要作用，它占动物总蛋白的25-30％；在所有的胶原蛋白中，I型胶原蛋白最常见于鱼类和一些哺乳动物，I型胶原蛋白是通过链间甘氨酸和酰胺之间的氢键形成的三螺旋结构。

目前，胶原蛋白提取方法主要有中性盐萃取法、酸提取法、碱提取法、酶提取法和重组DNA提取法等；但是现有文献报道的酸提、盐提、酶提鸡爪皮胶原蛋白，存在提取率较低的问题；还有文献采用酸酶复合法提取鲢鱼鱼鳞胶原蛋白，在60h的提取率为17.15％，依然提取时间过长并且提取效率不高；所以急需一种时间短、提取效率高的胶原蛋白提取方法。

发明内容

本发明的目的是发明一种简单易行的高效的从白鲢鱼产业下脚料鱼皮中提取胶原蛋白的方法，解决鱼产品加工生产的下脚料的资源浪费问题，克服传统胶原蛋白提取方法提取率低的缺点；本发明技术方法简单易行，提取效率高，并且关于酸法，酶法和超声预处理结合提取胶原蛋白的研究方法尚未见报道。

为了实现上述目的，本发明提供一种超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白的方法，按照下述步骤进行：

(1)原料的预处理：选取鱼皮作为原料，经洗净、剪碎后进行冻干处理，得到冻干鱼皮；然后将冻干鱼皮浸泡在NaOH溶液中，间隔一定时间更换NaOH溶液，浸泡一段时间后用蒸馏水冲洗至pH为中性，过滤后的鱼皮，再次浸泡于异丙醇溶液中进行脱脂，脱脂后在一定温度条件下进行离心，得到预处理后的鱼皮；

(2)把步骤(1)得到的预处理好的鱼皮浸泡在乳酸溶液中，得到混合溶液放入超声池，设置超声功率、超声频率和超声时间，在一定温度条件下进行超声酸预处理；

(3)在步骤(2)超声酸预处理后的混合溶液中加入胃蛋白酶进行酸酶提取，酸酶提取后进行离心，得到上清液，即为胶原蛋白粗提液；

(4)在步骤(3)得到的胶原蛋白粗提液中加入NaCl进行盐析，盐析后进行离心，得到沉淀溶解在乙酸溶液A中，然后依次使用乙酸溶液B和蒸馏水进行透析，经真空冷冻干燥后得到胶原蛋白。

优选的，步骤(1)中所述NaOH溶液的浓度为0.1mol/L；所述冻干鱼皮与NaOH溶液的用量比为1g:25mL；所述间隔的一定时间为2h；所述浸泡一段时间为6h。