[发明专利]一种快速检测sh2sh2基因型甜玉米的引物及其应用

权利要求书

1.一种快速检测sh2sh2基因型甜玉米的引物，其特征在于，所述引物根据sh2序列的突变位点特征设计，所述引物包括上游引物序列P1和下游引物序列P2，其中所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的快速检测sh2sh2基因型甜玉米的引物在普通玉米自交系转育成超甜玉米自交系的培育过程中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S₁.提取甜玉米的DNA；

S₂.利用SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物通过PCR检测法从步骤S₁提取的DNA中筛选出sh2sh2基因型甜玉米作为供体亲本；

S₃.辅助回交育种，利用普通玉米SH2SH2作为受体亲本与步骤S₂筛选出的供体亲本进行杂交，后代与受体亲本回交，直至最后经一代自交获得BC3F2群体，在BC3F2中挑选褶皱籽粒，即得到甜玉米sh2sh2自交系。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤S₁提取甜玉米DNA的方法包括以下步骤：

S_1-1.65℃预热CTAB缓冲液；

S_1-2.取甜玉米新鲜叶片0.2g置于1mL步骤S_1-1预热后的CTAB缓冲液中研磨，转入2mL离心管中；

S_1-3.将装有研磨液的离心管置于65℃水浴锅内，加热30min，并不时轻摇离心管；

S_1-4.待冷至室温后，加入与研磨液等体积氯仿与异戊醇混合液，所述混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24∶1，轻摇试管10min；

S_1-5.在10000rpm的转速下进行离心10min，之后将上清液转至另一1.5mL离心管中；

S_1-6.最后在装有上清液的离心管中加入500μL乙醇，置于-20℃轻摇混匀至产生絮状沉淀，再经过离心分离，所得沉淀采用乙醇清洗、晾干后得到DNA产品。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述CTAB缓冲液中含有1.17mM NaCl、0.0016mM EDTA pH＝8.0、0.835mM Ttis-HCl pH＝7.5、1.6％CTAB、1％β-疏基乙醇。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述S₂中PCR检测法包括以下步骤：

S_2-1.PCR扩增，将提取甜玉米DNA为模板，利用如权利要求1的引物序列进行PCR扩增，反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，52℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸10min，4℃保温；

S_2-2.取10μL步骤S_2-1获得的PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，选取有目的条带的甜玉米作为供体亲本。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤S_2-2选取的目的条带长度为694bp。