[发明专利]一种小麦和玉米幼苗单胺氧化酶分离纯化的方法

说明书

本发明公开一种小麦和玉米幼苗单胺氧化酶分离纯化的方法：包括如下步骤，1)幼苗预处理：将小麦和玉米幼苗清洗、浸泡2‑3小时；2)幼苗破碎：将浸泡后的幼苗倒入研磨机中，进行珠磨破碎；3)过滤，渣液分离：将破壁溶液离心处理，滤渣除去，收集上清液，即得粗提取液；4)精滤：得到单胺氧化酶精滤液；5)低温真空干燥：在酶精滤液中加入酶保护剂，置于低温真空干燥机中干燥，干燥时间为20‑35min；6)饱和盐析：过饱和硫酸铵盐析对其进一步分离纯化，去除其他蛋白质和小分子物质，获得单胺氧化酶产品。本发明采取的单胺氧化酶分离纯化方法，流程更加优化，提高了单胺氧化酶的产出量，低温真空干燥有效的保持单胺氧化酶的活性。

技术领域：

本发明涉及一种单胺氧化酶分离纯化的方法，特别涉及一种一种小麦和玉米幼苗单胺氧化酶分离纯化的方法。

背景技术：

单胺氧化酶(MAO)是含有黄素-腺苷-二核苷酸(FAD)的酶，其将生物胺转变为其相应的醛。单胺氧化酶为反映肝纤维化的酶，可分为两类。一类存在于肝、肾等组织的线粒体中，以FAD为辅酶，参与儿茶酚胺的分解代谢。另一类存在于结缔组织，是一种细胞外酶，无FAD而含有磷酸吡哆醛，只对伯胺起作用。血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似，能促进结缔组织的成熟，在胶原形成过程中，参与胶原成熟的最后阶段架桥形成，使胶原和弹性硬蛋白结合。

MAO多见于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，但在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在。在细胞内存在于线粒体外膜上，是不溶性酶。临床医学上，血清单胺氧化酶的活性高低能反应肝纤维化的程度，是诊断肝硬化的重要指标。而现有技术中对植物幼苗中的MAO的研究比较少，其原因之一是植物幼苗中单胺氧化酶的含量较少，且不易分离出来。

发明内容：

本申请为解决现有技术中植物幼苗单胺氧化酶分离提纯困难的技术问题，提供一种小麦和玉米幼苗单胺氧化酶分离纯化的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种小麦和玉米幼苗单胺氧化酶分离纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)幼苗预处理：将小麦和玉米幼苗清洗、浸泡2-3小时；

2)幼苗破碎：将浸泡后的幼苗倒入研磨机中，进行珠磨破碎；

3)过滤，渣液分离：将破壁溶液离心处理，滤渣除去，收集上清液，即得粗提取液；

4)精滤：得到单胺氧化酶精滤液；

5)低温真空干燥：在酶精滤液中加入酶保护剂，置于低温真空干燥机中干燥，干燥时间为20-35min；

6)饱和盐析：过饱和硫酸铵盐析对其进一步分离纯化，去除其他蛋白质和小分子物质，获得单胺氧化酶产品。

优选的，所述步骤4)的精滤中，包括步骤41)：双水相萃取，向步骤3)中获取的粗提取液中加入羧甲基纤维素钠和无机盐，震荡混合后，超声，静置，分离、收集上层液。

优选的，还包括步骤42)：将收集的上层液通过透析膜透析后，得到单胺氧化酶精滤液。

优选的，所述步骤2)中，加入一定量的研磨剂，进行珠磨破碎，研磨时间为20-30min。

优选的，所述酶保护剂保护剂为DTNB硝基苯甲酸二硫化合物与EDTA、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠中的两种或三种组合。

优选的，所述步骤5)中，低温真空干燥的温度为-20～-10℃，干燥时间为10-15小时。

更优选的，所述步骤5)中，低温真空干燥的温度为-15℃，干燥时间为30min。

更优选的，所述研磨时间为25min。