[发明专利]含有ME序列的一类新型抑制血小板聚集和抗血栓形成寡肽

说明书

本发明提出了一种分离的寡肽。该分离的寡肽包括ME，所述ME为与Gαq蛋白相互作用位点。发明人首次从鱼皮胶原蛋白中分离鉴定出，其ME位点为与Gαq蛋白相互作用的活性位点，进而发明人通过实验，筛选出了包括ME的系列寡肽，ME为与Gαq蛋白相互作用位点。根据本发明实施例的系列寡肽能够与Gαq蛋白相互作用，抑制凝血酶的活性和血小板聚集，并且该系列寡肽具有耐胃肠道消化酶酶解和易吸收的特点，其在体内的稳定性增加。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及含有ME序列的一类新型抑制血小板聚集和抗血栓形成寡肽，更具体地，本发明涉及分离的寡肽，分离的核酸、构建体、重组细胞、药物组合物或保健品、寡肽在制备药物、保健品或试剂盒中的用途。

背景技术

血小板是哺乳动物血液中的有形成分之一，一般呈圆盘状、无细胞核，却具有丰富的胞内颗粒。在正常的生理条件下，血小板的主要功能是促进止血和加速凝血，同时还有维护毛细血管壁完整性的功能。但是血小板的过度活化参与许多病理性过程，包括血栓形成、动脉粥样硬化和癌症等(Blood Reviews,2005,19(2),111-123)。当受到激动剂刺激而活化时，血小板一方面被激活发生聚集，参与血栓形成；另一方面，活化的血小板发生释放反应，将贮存在致密颗粒、α-颗粒或溶酶体内的物质排出，释放的多种生物活性物质对血栓形成、动脉粥样硬化和癌症等的发生和发展具有非常重要的作用。从致密颗粒中释放的活性成分的功能是募集其他血小板发生聚集。从致密体释放的物质主要有腺苷二磷酸(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)、5-羟色胺(5-HT)和Ca²⁺。其中ADP、5-HT和Ca²⁺均可促进血小板聚集，从而放大血小板的聚集作用。而α-颗粒含有大量的蛋白，这些蛋白包括粘着蛋白、趋化因子、细胞有丝分裂原和蛋白酶抑制剂。从血小板α-颗粒释放的细胞有丝分裂原含有多种生长因子，如TGF-β，ECGF，EGF，VEGF/VPF、IGF、bFGF和HGF等，这些生长因子也是重要的血管生成因子，促进肿瘤的发生和转移。而从α-颗粒中释放的趋化因和炎症因子，如IL-1β，CD40配体，PF4，MIP-1α和PDGF等可促进动脉粥样硬化的发生和发展(Trends in CardiovascularMedicine,2004,14(1),18-22.)。因此，抑制血小板的聚集和释放功能对预防和治疗血栓形成、动脉粥样硬化等心脑血管疾病和肿瘤的发生发展都具有重要意义。

抗血小板药物阿司匹林、氯吡格雷、噻氯匹定、阿昔单抗等在抑制血小板聚集以及抗血栓形成方面发挥重要作用，这些药物对于防治动脉粥样硬化和降低肿瘤发生发展的研究也广泛报道(中国循环杂志,2005,20(6),463-467；Blood 2018,131(16):1777–1789)。但是，这些药物的安全性、有效性使其临床应用受到一定的限制。因此，寻找和研究开发新的高效低毒的抗血小板活性成分具有十分重要的意义。

越来越多的研究表明来自天然食物或动植物的生物活性肽对人体健康有着积极的作用。这些生物活性肽能够通过调节人体内各种生理过程从而对人体产生有益影响，主要包括抗氧化肽、降血压肽、免疫调剂肽、抗菌肽等。近年来，抗血小板肽的研究得到越来越多的关注，相比传统的抗血小板药物，这些抗血小板活性肽具有毒副作用小、易吸收、药效持续时间长等优点。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

发明人通过大量的活性筛选，首次从鱼皮胶原蛋白中分离鉴定了二肽ME对凝血酶诱导的血小板聚集有特异性抑制作用，并进一步明确了其作用靶点是Gαq蛋白。发明人将筛选得到的ME二肽，并且通过氨基酸修饰得到了系列衍生物三肽，将含有ME序列的三肽与靶蛋白进行分子对接，虚拟筛选出了活性更高的Gαq蛋白小分子配体。根据细胞水平的高通量筛选和功能验证，开发出了具有抗血小板治疗前景的含ME序列的三肽。本发明所涉及的ME二肽和新型三肽序列结构，迄今尚未见相关报道。