[发明专利]检测常见十一种食源性致病菌的多重PCR试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了十一种食源性致病菌检测用公共引物介导的PCR试剂盒及其应用；利用公共引物介导的多重PCR技术，以11种常见食源性致病菌（沙门氏菌、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌、肠出血性大肠埃希菌O157、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、A型肉毒梭菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌）的特异性基因作为检测标，建立一种高效、高特异性、高通量的多重PCR检测体系，研发适用于常见食源性致病菌检测的核酸检测试剂盒。公共引物敏感性达到10³copies/μL，构建的同时检测11种食源性致病菌的UP‑M‑PCR体系，通过单模板和二模板实验验证UP‑M‑PCR体系具有良好的特异性，细菌基因组DNA检测体系敏感性高至0.01ng/μL。

技术领域

本发明属于菌株检测技术领域，具体涉及食源性致病菌的检测技术，更具体为十一种食源性致病菌检测用公共引物介导的PCR试剂盒及其应用。

背景技术

食源性疾病是指通过摄食而进入人体的有毒有害物质（包括生物性病原体）等致病因子所造成的疾病。随着社会经济的发展，食源性疾病已经越来越成为全球公共卫生关注重点，每年都会导致相当大的发病率和死亡率，造成巨大的经济负担。2010年据世界卫生组织估计大约有20亿例食源性疾病病例数，即使是工业化国家每年也约有30%的人患有食源性疾。在英格兰和威尔士，每年约有236.6万人患有食源性疾病，30%的疫情是通过食物传播，美国每年发生有7600万例食源性疾病，澳大利亚每年发生有200万次食物中毒事件导致损失4.9亿至19亿澳元（参见Hedberg C. Food-related illness and death in theUnited States: Emerg Infect Dis. 1999 Nov-Dec;5(6):840-2. doi: 10.3201/eid0506.990624；Group OFW. Reported foodborne illness and gastroenteritis inAustralia: annual report of the OzfoodNet network, 2004. Commun Dis Intell QRep 2005;29(2):165-92）。而在中国每年约有2亿例食源性疾病病例，根据我国食源性疾病监测网统计2001年至2010间共发生5021起食源性疾病，约有14万人发病，但由于食源性疾病临床特征具有轻度自愈，导致大多数食源性疾病病例数难以上报，因此有报告称我国食源性疾病统计数不到实际发生的10%（参见胡运清. 食源性疾病的流行特征和影响因素分析. 中国社区医师(医学专业) 2010;12(31):226）。据WHO估计全球每年食源性疾病漏报率高达90%，以上统计数据也不过是实际数据的冰山一角。引起食源性疾病的主要原因包括有细菌性、真菌性、动植物性以及化学性食物中毒这四大类，在我国食源性疾病爆发案例中，主要致病因子为致病菌。2006年-2010年间中国爆发了2023起食物中毒事件，由微生物引起的事件占40.09%，从中国食源性疾病监测网数据分析中也发现在众多食源性疾病例数中，由微生物引起的占46.4%，由化学物质引起的占24.1%，由有毒动植物引起的占14.7%。而引起食物中毒的常见致病菌主要包括有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌、大肠杆菌 O157:H7、志贺菌、阪崎肠杆菌、肉毒杆菌以及产气荚膜梭菌等。