[发明专利]PCR反应体系、试剂、试剂盒和PCR方法

权利要求书

1.一种PCR反应体系，其特征在于，所述PCR反应体系包含以下组分：CHAPS 0.05%w/v、Triton X-100 0.01%w/v、十二烷基硫酸钠0.005%w/v、二硫苏糖醇0.5mmol/L、海藻糖2%w/v、葡聚糖6000 1%w/v、聚乙二醇4000 2%w/v。

2.根据权利要求1所述的PCR反应体系，其特征在于，所述PCR反应体系还包括抗抑制剂；所述抗抑制剂包括BSA、HSA、gp32蛋白和明胶中的至少一种；所述抗抑制剂的浓度为0.05~10mg/ml。

3.根据权利要求2所述的PCR反应体系，其特征在于，所述抗抑制剂为BSA。

4.根据权利要求2所述的PCR反应体系，其特征在于，所述抗抑制剂的浓度为0.2~2mg/ml。

5.根据权利要求1所述的PCR反应体系，其特征在于，所述PCR反应体系还包括缓冲物质、阳离子、酶、脱氧核糖核苷酸、核糖核酸酶抑制剂和溶剂中的至少一种；

所述缓冲物质包括Tris盐酸、Tris磷酸、Tricine、Bicine、HEPES、MOPS、TAPS和CAPS中的至少一种；所述缓冲物质的浓度为5mmol/L~500 mmol/L；

所述PCR反应体系的pH为7~10；

所述阳离子包括单价阳离子和二价阳离子中的至少一种；所述单价阳离子为K⁺和/或NH₄⁺，其浓度为10mmol/L~200mmol/L；所述二价阳离子为Mg²⁺，其浓度为1.5mmol/L~6mmol/L；

所述酶包括DNA聚合酶和/或逆转录酶；所述DNA聚合酶包括Taq，Tth，Tfl、TLI、Tne、Tma、vent^TM、Phusion^TM、Pfu和KOD中的至少一种；

所述DNA聚合酶的浓度为1-20 U/test；所述逆转录酶包括AMV逆转录酶和/或MMLV逆转录酶；逆转录酶的浓度为10-500 U/test；

所述脱氧核糖核苷酸的浓度为100μmol/L~600μmol/L；

所述核糖核酸酶抑制剂为人源和/或鼠源RNase inhibitor；所述核糖核酸酶抑制剂的浓度为10~5000U/ml。

6.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述缓冲物质为Tris盐酸。

7.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述缓冲物质的浓度为5mmol/L~100 mmol/L。

8.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述PCR反应体系的pH为8.5~10。

9.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述单价阳离子的浓度为30mmol/L~60mmol/L。

10.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述DNA聚合酶包括Taq、Tth、Tfl、TLI和Phusion^TM中的至少一种。

11.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述DNA聚合酶的浓度为2-6 U/test。

12.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述逆转录酶的浓度为50-100U/test。

13.根据权利要求5所述的PCR反应体系，其特征在于，所述核糖核酸酶抑制剂的浓度为100~1000U/ml。