[发明专利]UPLC-MS法鉴定桂枝芍药知母汤中主要有效成分

说明书

本发明公开了一种UPLC‑MS法鉴定桂枝芍药知母汤中主要有效成分，涉及中药复方制剂的检测技术领域。通过对桂枝芍药知母汤的提取物进行梯度洗脱，再采用电喷雾离子源，在正、负离子模式下进行扫描，共观察到31个主要色谱峰，鉴定出其中的28个化合物。本发明能够同时并快速的检测桂枝芍药知母汤中的有效成分，实现对桂枝芍药知母汤中成分的鉴定分析，为后续的桂枝芍药知母汤的质量分析和质量控制提供更多的依据，也为复方制剂的成分分析及质量控制提供方法参考。

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种UPLC-MS法鉴定桂枝芍药知母汤中主要有效成分。

背景技术

桂枝芍药知母汤出自《金匮要略·中风历节病脉证治篇》，由桂枝、芍药、知母、甘草、防风、白术、麻黄、生姜、麻黄九味药组成，是治疗痹症的经典名方，具有祛风除湿、温经散寒、滋阴清热的功效。

目前对桂枝芍药知母汤的研究主要集中于其药效学研究，，如类风湿关节炎等，对其有效成分的研究较少，董运茁HPLC同时测定桂枝芍药知母汤中7个有效成分的含量，也仅仅只能分析其中7种成分，不能有效反映出桂枝芍药知母汤的质量；覃艺采用HPLC 指纹图谱对桂枝芍药知母汤中的成分进行了分析，共标定了26个共有峰，但仅指认了 8个色谱峰；上述所采用的HPLC的检测时间过长，检测的成分也有限。而中药复方制剂含有多种活性成分，仅控制少数化学成分不能完全控制其质量并反映临床疗效，本申请采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-tof-MS)联用技术，对桂枝芍药知母汤中的成分做了进一步的分析、鉴定，为其质量评价和控制提供更多的依据。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种UPLC-Q-tof-MS法鉴定桂枝芍药知母汤中主要有效成分，具体内容如下：

一种鉴定桂枝芍药知母汤中主要有效成分的方法，所述的方法为超高效液相高分辨飞行时间质谱法UPLC-Q-tof-MS，具体色谱条件与质谱条件如下：

a.色谱条件

色谱柱：BEH C18，2.1*100mm，1.7um，Waters；流动相：A为乙腈，B为0.1％甲酸水；柱温：45℃；流速：0.40mL/min；进样体积：1uL；进行梯度洗脱；

梯度洗脱程序见下表：

b.质谱条件

电离模式：电喷雾电离，正离子模式/负离子模式；毛细管电压：2.0kv；锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：400℃；脱溶剂气流速度：800L/hr；扫描模式： MSe；碰撞能范围：25-45ev。

进一步，通过该方法从桂枝芍药知母汤中筛选并鉴定出28个化合物，分别为：苹果酸、柠檬酸、麻黄碱、没食子酸、伪麻黄碱、3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid、新芒果苷、芍药内酯苷、芒果苷、芍药苷、升麻素苷、异佛莱心苷、芹糖甘草苷、甘草苷、 5-O-甲基维斯阿米醇苷、知母皂苷E1、知母皂苷N、知母皂苷B2、知母皂苷D、异甘草苷、甘草素、知母皂苷C、22β-acetoxyglycyrrhiz in、Licoricesaponin E2、知母皂苷I、Licoricesaponin G2、甘草酸。

进一步，所述的桂枝芍药知母汤的样品制备方法为：

①称取桂枝、白芍、甘草、麻黄、知母、生姜、白术、防风、炮附片饮片，加纯净水浸泡，武火煮沸，文火微沸至400mL，过滤，冷冻干燥，制得桂枝芍药知母汤物质基准；

②取桂枝芍药知母汤物质基准冻干粉加水溶解后，加乙醇，放置24h后，取上清液浓缩至无醇味，制得桂枝芍药知母汤供试品冻干粉。

进一步，所述的桂枝芍药知母汤的样品制备方法为：