[发明专利]一种缩短NK细胞培养周期的培养方法在审
| 申请号： | 201910542181.3 | 申请日： | 2019-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN110272872A | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 邓蒙蒙;邢永梅;程箫;刘丹;吴疆;王保如 | 申请（专利权）人： | 安徽瑞达健康产业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 合肥方舟知识产权代理事务所(普通合伙) 34158 | 代理人： | 刘跃 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新区*** | 国省代码： | 安徽;34 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养周期 生长素 单个核细胞 换液 外周血单个核细胞 无血清细胞培养基 扩增组合物 细胞毒活性 扩增培养 免疫分选 体外培养 同种异体 去除 体外 自体 增高 刺激 收获 | ||
1.一种缩短NK细胞培养周期的培养方法，包括以下步骤：
(1)分离单个核细胞；
(2)免疫去除CD3+T淋巴细胞，去除CD3+T淋巴细胞后的单个核细胞的接种浓度为0.1-2×106cells/ml；
(3)加入无血清培养基、扩增组合物；
(4)培养第2-5天全换液；
(5)NK细胞收获；
其特征在于：步骤3中加入的扩增组合物为：IL-2和生长素。
2.根据权利要求1所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于：步骤3中加入的扩增组合物终浓度为500-2000U/ml IL-2和5-100μg/ml生长素。
3.根据权利要求1所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于：免疫去除CD3+T淋巴细胞的方法为免疫磁珠分选、膜泡分选和流式细胞仪分选等；去除CD3+T淋巴细胞后的单个核细胞的接种浓度为0.1-2×106cells/ml。
4.根据权利要求2所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于所述IL-2浓度为1000-1800U/ml。
5.根据权利要求2所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于所述生长素浓度为5-30μg/ml。
6.根据权利要求2所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于所述单个核细胞来源于外周血、脐带血、骨髓或诱导性多能干细胞。
7.根据权利要求2所述缩短NK细胞培养周期的培养方法，其特征在于：优选第4天全换液培养，细胞浓度优选为1×106cells/ml；第4天后根据细胞生长状态补加含扩增所需细胞因子的无血清培养基调整细胞浓度为1×106cells/ml。
8.一种体外扩增NK细胞的应用，其特征在于：采用权利要求1-7任一所述方法制备NK细胞用于肿瘤细胞免疫治疗。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于安徽瑞达健康产业有限公司，未经安徽瑞达健康产业有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910542181.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
