[发明专利]一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法

权利要求书

1.一种金腰染色体制片方法，具体步骤为:(1)获取根尖：在晴天的上午9点左右，选取盆栽里的生长茂盛的大叶金腰植株，取其根尖部位3cm左右，然后用蒸馏水清洗干净根表面附着的泥土；

(2)预处理：将洗干净的根尖放入盛有重蒸水的小瓶中，置于4℃冰箱中，进行预处理2.5h；

(3)固定：将预处理后的根尖吸去水分，投入盛有固定液的小瓶子中，所述固定液为乙醇：冰醋酸＝3:1，进行固定保存；

(4)前低渗：用镊子取出根尖，然后重蒸水洗净，在培养皿中切取尖端白色部分1mm左右，置于盛有双蒸水的EP管中浸泡处理40min，期间更换低渗液3次；

(5)酶解去壁：低渗后，用移液器吸去低渗液，加入2％混合酶，0 .2mL，然后放入28℃水浴锅中水浴4.5h，酶解过程中轻摇EP管3次，使酶液充分作用于材料，所述混合酶为4％的纤维素酶，4％的果胶酶按照1:1制备成；

(6)后低渗：吸去酶液，用重蒸水清洗根尖2-3次，然后置于重蒸水中进行低渗，水浴28℃，40min左右；

(7)敲片和染色：取低渗后的根尖2-3个，置于滴有固定液的载玻片上，所述固定液为乙醇：冰醋酸＝3:1，并用玻璃棒尽量压碎根尖，分散细胞，压碎后使破碎的组织细胞在载玻片上尽量铺散均匀，压碎根尖期间加入固定液保持水环境，根尖组织均匀分散在载玻片后用酒精灯内焰干燥，干燥后的载玻片直接放入有改良吉姆萨染液的染缸中浸没染色40min，染色完成后，载玻片用重蒸水冲洗干净，备用，所述改良吉姆萨染液的配方为：先由吉姆萨粉末与甘油按照质量体积比2:1研磨混合制成母液，实验取用时将吉姆萨母液与磷酸盐缓冲液按体积比1：20进行；

(8)镜检观察：使用OLYMPUS BX51明视野显微镜，10倍目镜、100倍油镜观察，找到理想分散且清晰的染色体，然后用OLYMPUS DP73摄像头拍照，保存照片。