[发明专利]目标基因DNA甲基化作为分子标志物在制备判别结直肠组织癌变进展试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了目标基因DNA甲基化作为分子标志物在制备判别结直肠组织癌变进展试剂盒中的应用，该目标基因DNA甲基化为COL25A1、GALR1、INHBA和HKDC1基因的一种或多种。本发明首次发现SEQ ID NO.1～4所示的DNA甲基化分子标志物能够用于判别结直肠组织癌变进展，获得的模型具有较好的鉴别诊断效能，其AUC为0.662‑0.734。合并4条目标基因DNA甲基化标志物的模型AUC为0.764。使用本发明提供的DNA甲基化分子标志物判别结直肠息肉与结直肠癌，具有高灵敏度、高特异性的特点，并且能够辅助监测结直肠息肉进展到结直肠癌。

技术领域

本发明涉及临床检验诊断技术领域，尤其涉及目标基因DNA甲基化作为分子标志物在制备判别结直肠组织癌变进展试剂盒中的应用。

背景技术

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的消化系统恶性肿瘤之一。据国际癌症研究中心(International Agency for Research on Cancer，IARC)统计，2018年全球约有180万结直肠癌新发病例，分别是女性第二位、男性第三位高发肿瘤。近几十年来，随着我国社会经济的快速发展，“西方化”带来了生活方式和饮食结构的转变，我国结直肠癌发病率上升趋势明显，并呈现年轻化特点。结直肠癌已然成为严重威胁我国居民健康的重大公共卫生问题。

目前认为，结直肠癌的发生发展是多因素共同作用下发生的多阶段、多步骤的由“正常粘膜-腺瘤-癌”的转变过程。除外界环境因素和机体自身的遗传变异外，表观遗传的改变例如DNA甲基化、组蛋白修饰以及多种非编码RNA的调节等均与结直肠癌的发生发展相关。

DNA甲基化是最早发现的表观修饰途径之一，其可在不改变DNA原始序列的情况下调控基因表达。在哺乳动物中，CpG以两种形式存在：一种是分散于DNA序列中；另一种呈现高度聚集状态，人们称之为CpG岛。在正常组织中，CpG岛常处于非甲基化状态，而散在分布的CpG位点中有70％-90％处于甲基化状态，抑制所在基因的表达。目前已有许多研究证实DNA甲基化水平的异常与包括结直肠癌在内的多种癌症的发生发展相关。由于CpG岛局部异常甲基化改变早于细胞的恶性增生，且甲基化状态相对稳定并易于检测，DNA甲基化作为恶性肿瘤早期诊断标志物具有很大的优越性。因此，寻找结直肠癌的发生发展的相关基因的DNA甲基化，有助于结直肠癌的早发现、早诊断和早治疗。

目前，关于结直肠癌相关的DNA甲基化分子标志物的研究已有大量报道，例如：

申请公告号为CN102686744A的发明专利申请文献公开了结直肠癌早期诊断的特异性的甲基化生物标志物，标志物为SORCS3、SIMI和SDC2中的一种或多种基因的CpG岛或基因的启动子CpG岛。

申请公告号为CN108315418A的发明专利申请文献公开了男性结直肠癌诊断、筛查与预测的外周血细胞DNA甲基化标志物，标志物为基因RPS24转录起始点前后序列的以下三组CpG位点中第(1)组或者第(1)组与第(2)组或第(3)组组合：(1)+22、+27和+29；(2)-24、-18、+89和+92；(3)+136。

申请公告号为CN108660209A的发明专利申请文献公开了一种基于BMP3基因甲基化序列的结直肠癌早期检测方法，通过检测BMP3基因启动子区的一段甲基化序列是否发生甲基化，辅助诊断早期结直肠癌。

申请公告号为CN108676878A的发明专利申请文献公开了一种基于NDRG4基因甲基化序列的结直肠癌早期检测方法，通过检测NDRG4基因启动子区的一段甲基化序列是否发生甲基化，辅助诊断早期结直肠癌。