[发明专利]瘦素免疫原、杂交瘤细胞、单克隆抗体、多克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及一种瘦素免疫原、杂交瘤细胞、单克隆抗体、多克隆抗体及应用。该瘦素免疫原包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽。由该瘦素免疫原制备得到的抗瘦素的单克隆抗体的特异性较好、灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及一种瘦素免疫原、杂交瘤细胞、单克隆抗体、多克隆抗体及应用。

背景技术

瘦素(Leptin)是人的ob基因编码的含有167个氨基酸残基的单链蛋白质，其由脂肪细胞分泌到血浆后，在信号肽酶的作用下除去氨基端的21个氨基酸残基。因此，血浆中存在的瘦素全长为146个氨基酸残基，分子量约为16kDa。瘦素具有较好的亲水性，在血浆中大约80％的瘦素与血浆蛋白质结合，只有少部分以游离形式存在。瘦素通过与广泛存在于中枢神经系统、脂肪、心、肝、肺、肾、胰腺等不同组织和器官的特异性受体和相应的信号传导系统发挥生物效应，参与糖、脂肪和能量代谢的调节。

研究发现，在很多生理和病理情况下，人的瘦素水平会发生变化，对许多能量代谢有关疾病的发生、发展、预后和用药疗效检测都具有非常重要的临床指导价值。例如，肥胖者的血清瘦素浓度均高于非肥胖者，因此体内瘦素水平对肥胖的预防和治疗具有一定积极意义；恶性肿瘤患者血清中瘦素水平显著高于正常对照，经治疗后瘦素水平会相应降低，表明瘦素可能作为评价恶性肿瘤患者病情和用药前后疗效监控的指标；在正常妊娠中血清瘦素水平会随妊娠进展逐渐上升，妊娠高血压发生时瘦素水平也呈上升趋势，因此，瘦素对判断妊娠高血压病情具有一定临床价值。总之，瘦素与多种急慢性疾病相关，随着人们对其认识的加深，可以将其更好地应用于临床。

目前，瘦素的检测方法主要依赖于瘦素抗体与检测样本中的瘦素的特异性结合能力。因此，抗瘦素抗体的特异性和灵敏度对于瘦素含量的检测十分重要。

但是，目前市场上特异性较好、灵敏度较高的抗瘦素抗体还较少，不能满足市场的需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种瘦素免疫原，由该瘦素免疫原制备得到的抗瘦素的单克隆抗体的特异性较好、灵敏度较高。

此外，还提供一种分泌特异性较好、灵敏度较高的抗瘦素的单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及其制备方法和应用。

一种瘦素免疫原，包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽。

上述瘦素免疫原包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，由该瘦素免疫原制备得到的抗瘦素的单克隆抗体，能够特异性识别瘦素氨基端的41位～60位氨基酸残基，与瘦素的亲和力和灵敏度较高。

在其中一个实施例中，所述瘦素免疫原还包括载体蛋白，所述载体蛋白与所述多肽偶联。

一种分泌抗瘦素单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，包括以下步骤：

用免疫原免疫动物，得到免疫后的动物的脾细胞，其中所述免疫原为上述瘦素免疫原；

将所述脾细胞与骨髓瘤细胞融合，然后筛选得到阳性融合细胞；及

对所述阳性融合细胞进行亚克隆，得到所述分泌瘦素单克隆抗体的杂交瘤细胞。

一种分泌抗瘦素单克隆抗体的杂交瘤细胞，由上述分泌抗瘦素单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法制得。

一种抗瘦素的单克隆抗体，由上述分泌抗瘦素单克隆抗体的杂交瘤细胞分泌。

一种瘦素免疫原，包括氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多肽。

在其中一个实施例中，所述瘦素免疫原还包括载体蛋白，所述载体蛋白与所述多肽偶联。

一种抗瘦素的多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

用上述的瘦素免疫原免疫动物，得到所述抗瘦素的多克隆抗体。