[发明专利]一种培养处理羟乙基纤维素生产外排废水所用复合菌的培养基及其应用

权利要求书

1.一种培养处理羟乙基纤维素生产外排废水所用复合菌的培养基在制备复合菌剂中的应用，其特征在于：所述复合菌培养基的成分为：可溶性淀粉5g/L、玉米淀粉8g/L、葡萄糖5g/L、甘油2g/L、尿素3g/L、(NH4)₂SO₄ 2g/L、NaCl 1g/L、K₂HPO₄ 1g/L以及KH₂PO₄ 2g/L；

复合菌剂为气单胞菌（Aeromonassp.）PR-DN1、产碱杆菌（Alcaligenes sp.）PR-DN2、不动杆菌（Acinetobacter sp.）PR-DN3、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus .）PR-DN4、微小杆菌（Exiguobacterium sp.）PR-DN5；五种菌株分别于2019年4月15日、2019年5月20日、2019年5月20日、2019年5月20日、2019年5月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，PR-DN1的保藏编号为CCTCC NO:M2019255，PRDN2的保藏编号为CCTCC NO: M2019372，PR-DN3的保藏编号为CCTCC NO:M2019373，PR-DN4的保藏编号为CCTCC NO:M2019374、PR-DN5的保藏编号为CCTCC NO:M2019413；

所述复合菌培养基pH为 6.0-7 .2；

所述复合菌剂的制备步骤如下：

（1）各菌株的培养：将气单胞菌（Aeromonas sp.）PR-DN1、产碱杆菌（Alcaligenes sp.）PR-DN2、不动杆菌（Acinetobacter sp .）PR-DN3、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus .）PRDN4、微小杆菌（Exiguobacterium sp .）PR-DN5五种菌种分别接种于LB培养基进行培养，将培养后的各菌株按比例混合；

（2）菌剂放大培养：将步骤（1）得到的混合菌液接种于LB培养基中进行培养后，再将混合菌种液接种于复合菌培养基中，并放置于发酵罐中进行培养，加入消泡剂进行发酵，发酵完毕后出罐；

（3）复合菌剂制备方法：将发酵获得的菌液在5000r/min离心机离心15min后，去除上清液，加入生理盐水在5000r/min离心机离心15min，去除上清液，获得菌泥，加入生理盐水配制成菌液悬浊液，再加入添加剂，制备成复合菌剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（2）中混合菌液的体积为LB培养基体积的1-5%；所述混合菌种液的体积为复合菌培养基的2-10%。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（1）中气单胞菌（Aeromonas sp.）PR-DN1、产碱杆菌（Alcaligenes sp .）PR-DN2、不动杆菌（Acinetobacter sp.）PR-DN3、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus .）PR-DN4、微小杆菌（Exiguobacterium sp.）PR-DN5五种菌种的活菌数比例为1-10：1-5：1-5：1-10：1-5。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（3）中复合菌剂的总活菌数为1×10⁹cfu/g-4× 10⁹cfu/g；所述步骤（3）制成的复合菌剂中，五种菌体的体积之和占复合菌剂总体积的20%-50%。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（1）中在LB培养基中进行培养的条件为：30℃、180r/min条件下摇床培养24-28h；所述步骤（2）中在LB培养基中进行培养的条件为：30℃、180r/min条件下摇床培养24-28h；所述步骤（2）中在复合菌培养基中进行培养的条件为：30℃、溶解氧40%-60%、pH为7 .0条件下发酵罐培养36-60h。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述步骤（3）中添加剂为营养剂、保藏助剂、载体的混合物；所述步骤（2）中出罐时，发酵液中活菌数达到1× 10¹⁰-2×10¹¹cfu/mL；所述步骤（2）中加入的消泡剂体积为2/10000发酵液体积；所述步骤（2）中，复合菌培养基的体积为发酵罐体积的75%，发酵过程通入的气体为空气。