[发明专利]一种牛轮状病毒、牛冠状病毒二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种预防牛轮状病毒、牛冠状病毒的二联灭活疫苗及其制备方法。本发明所述疫苗其有效成分包括牛轮状病毒和牛冠状病毒的灭活抗原，该二联灭活疫苗的抗原成分可经传代细胞系(针对牛轮状病毒与牛冠状病毒)或微载体悬浮培养(针对牛轮状病毒)进行病毒增殖，并对制苗工艺等进行了优化。疫苗安全、效力试验与抗体跟踪结果显示：使用本发明的二联灭活疫苗免疫牛后无不良反应，免疫怀孕牛后不导致流产。免疫牛都产生了免疫保护，新生犊牛可通过母乳获得高水平母源抗体。结果说明本发明的疫苗安全可靠，可用于预防犊牛腹泻的发生。

技术领域

本发明涉及一种牛轮状病毒、牛冠状病毒二联灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

犊牛腹泻是导致新生犊牛高死亡率的一种疾病，可造成严重的经济损失，其病原主要包括牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV)和牛冠状病毒(Bovine Coronavirus,BCV)。BRV属呼肠孤病毒科、轮状病毒属，为双股RNA病毒，多感染1月龄以内的犊牛，临床症状主要表现为水样腹泻、精神沉郁、食欲废绝、严重脱水与酸中毒。BCV属冠状病毒科、冠状病毒属，为单股正链RNA病毒，主要编码S、M、N、E和HE等5种蛋白，除导致犊牛腹泻外，亦可造成成年牛冬痢、出血性腹泻与各年龄段牛的呼吸道感染。BCV主要感染10日龄以内的犊牛，潜伏期1～2天，以排黄绿色稀便、血便为特征。BRV、BCV均能够单独引起犊牛腹泻，但当BRV、BCV混合感染或继发细菌、寄生虫感染后，可致死亡率上升，造成更严重的经济损失。

通常情况下，BRV、BCV均可在患病犊牛的新鲜粪便、肠道内容物中分离得到，BRV可通过接种恒河猴肾细胞(MA-104)进行病毒分离，BCV常接种人结肠癌细胞(HCT-8)进行病毒的分离鉴定。但由于BRV的病毒分离比较困难，需经一定浓度的胰蛋白酶等蛋白水解酶处理后才能有效感染细胞。

预防犊牛腹泻最好的措施是免疫疫苗，灭活疫苗安全性好，不存在散毒、毒力返强的风险，可用于怀孕牛的免疫，能够快速服务于市场，有广阔发展前景。

发明内容

本发明的目在于采用恒河猴肾细胞(MA-104)繁殖牛轮状病毒(BRV)，采用人结肠癌细胞(HCT-8)繁殖牛冠状病毒(BCV)，进而将上述两种病毒作为抗原制备成预防BRV和BCV的二联灭活疫苗。

本发明的技术方案

1.一种牛轮状病毒、牛冠状病毒二联灭活疫苗，其特征在于该灭活疫苗含有牛轮状病毒、牛冠状病毒的灭活抗原；

所述灭活抗原是牛轮状病毒JY株与牛冠状病毒YQ株，上述两株病毒已于2019年05月16日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号分别为CGMCC No.17686、CGMCC No.17687；

所述二联灭活疫苗用于预防牛轮状病毒、牛冠状病毒感染引起的犊牛腹泻。

2.本发明所述的牛轮状病毒、牛冠状病毒二联灭活疫苗，其特征在于该疫苗制备步骤包括：

(1)细胞培养：将MA-104细胞采用贴壁与微载体培养的方式进行传代和培养；将HCT-8细胞采用贴壁培养的方式进行传代和培养；

(2)制苗用抗原的制备：将JY株牛轮状病毒生产种毒接种在MA-104细胞上，通过细胞繁殖获得制备疫苗用病毒抗原；将YQ株牛冠状病毒生产种毒接种在HCT-8细胞上，并通过细胞繁殖获得制备疫苗用病毒抗原；

(3)抗原灭活：将制备的病毒液使用灭活剂进行灭活；

(4)配苗：加入相应的佐剂后进行配苗。

本发明有益效果