[发明专利]一种表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌的构建及其应用

权利要求书

1.一种表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌，其特征在于：是在植物乳杆菌的基因组中分别插入C型产气荚膜梭菌α毒素的基因序列、β1毒素的基因序列和β2毒素的基因序列。

2.根据权利要求1所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌，其特征在于：C型产气荚膜梭菌α毒素的基因序列如SEQ ID No.1所示，C型产气荚膜梭菌β1毒素的基因序列如SEQ ID No.2所示，C型产气荚膜梭菌β2毒素的基因序列如SEQ ID No.3所示。

3.一种根据权利要求1所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌的构建方法，其特征在于：具体步骤如下：

步骤一：C型产气荚膜梭菌α、β1、β2毒素目的基因片段的扩增；

步骤二：PCR产物与pSIP409-pgsA’载体的连接、转化，筛得重组质粒pSIP409-pgsA’-α，pSIP409-pgsA’-β1以及pSIP409-pgsA’-β2；

步骤三：重组质粒pSIP409-pgsA’-α，pSIP409-pgsA’-β1以及pSIP409-pgsA’-β2，电转化植物乳杆菌NC8，筛得NC8-pSIP409-pgsA’-α，NC8-pSIP409-pgsA’-β1以及NC8-pSIP409-pgsA’-β2。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：步骤一中扩增所用引物序列为：

α-F：5'-GGCTCTAGATGGGATGGAAAGATTGATGGAACAGG-3'(SEQ ID No.4)

α-R：5'-GGCAAGCTTTTTTATATTATAAGTTGAATTTCCTGAAATCCACTC-3'(SEQ ID No.5)

β1-F：5'-GGCTCTAGAATGAAGAAAAAATTTATTTCATTA-3'(SEQ ID No.6)

β1-R：5'-CGGGGTACCCTAAATAG CTGTTACTTTGTGAGT-3'(SEQ ID No.7)

β2-F：5'-GGCTCTAGAATGAAAAAAATTATTTCAAA-3'(SEQ ID No.8)

β2-R：5'-CGGGGTACCCTATGCACAATACCCTTCAC-3'(SEQ ID No.9)。

5.权利要求1所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌在抗产气荚膜梭菌α、β1、β2毒素中的应用。

6.权利要求1所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌的给药方式为黏膜给药。

7.根据权利要求6所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌，其特征在于：所述的黏膜给药为口服。

8.根据权利要求6所述的表面展示C型产气荚膜梭菌α、β毒素蛋白重组植物乳杆菌的粘膜给药有效抗原量比例为NC8-pSIP409-pgsA’-α：NC8--pSIP409-pgsA’-β1：NC8-pSIP409-pgsA’-β2＝1：1：1。