[发明专利]一种对常规稳定二倍体水稻进行性状改良的方法

权利要求书

1.一种对常规稳定二倍体水稻进行性状改良的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用纯合稳定的二倍体水稻成熟胚诱导同源四倍体水稻；

(2)再利用四倍体水稻花药诱导愈伤回复成二倍体水稻；

所述步骤(1)的诱导过程如下：

a.种子预处理：将成熟的水稻种用剪刀去除四分之三的或者更多的胚乳部分，留下带有胚的部分；在超净台内，将材料倒入三角瓶内，写好编号，先用75％的酒精表面消毒40s左右，然后用灭过菌的纯水洗干净，加入0.1％升汞浸泡15min左右，浸泡的过程中要间隔的摇晃，后用纯水洗3-4次；

b.种子胚诱导愈伤组织：将消毒后的材料接到诱导培养基上，每瓶约8个，封好口放入26℃的组培间进行暗培养，待愈伤组织长到黄豆粒大小便进行秋水仙素加倍处理；

c.秋水仙素加倍处理：把愈伤组织接入加倍液中在摇床中摇晃48小时，摇床设置为27℃，110r/min，加倍结束后用无菌水把愈伤组织洗干净并接入恢复培养基中继续暗培养，恢复的时间约为7-15天；

d.分化出幼苗得到四倍体植株：愈伤恢复正常后转入分化培养基进行光培养，温度为27℃，转分化后约一周就有愈伤组织变绿，接着就会慢慢的长出苗；

e.生根及移栽：待分化出苗后转入生根培养基，待根系长好后，打开封口，加入清水，在温室内练苗一周左右，然后拿出来用清水把根部的培养基冲洗干净，移栽至田间；

所述步骤(2)的诱导过程如下：

a.取材及前处理：从步骤(1)中的试验田中选取叶枕距为4-8cm的四倍体稻穗，用湿纱布包好后放在塑料袋中封口于4℃的冰箱里面冷处理7天；

b.花药诱导愈伤组织：经过冷处理的幼穗，在超净工作台上70％酒精处理30s后用0.1％升汞溶液处理10min，然后挑取顶尖淡绿色、下部乳白色的颖花，用尖镊子去掉颖壳将带有花药的颖花接种在诱导培养基中；

c.分化出幼苗得到二倍体植株：愈伤长到一定大小的时候转入分化培养基进行光培养，温度为27℃；

d.生根及移栽：待分化出苗后转入生根培养基，待根系长好后，打开封口，加入清水，在温室内练苗一周左右，然后拿出来用清水把根部的培养基冲洗干净，移栽至田间。

2.根据权利要求1所述的一种对常规稳定二倍体水稻进行性状改良的方法，其特征在于：所述步骤(2)中接种颖花的诱导培养基包括液体培养基和固体培养基。

3.根据权利要求2所述的一种对常规稳定二倍体水稻进行性状改良的方法，其特征在于：所述液体培养基放在30℃、100r/min的摇床中暗培养三天，后调低培养温度至26℃、转速不变继续暗培养，大约30天左右可见培养基底部出现淡黄色的小颗粒愈伤，后逐渐变大。

4.根据权利要求2所述的一种对常规稳定二倍体水稻进行性状改良的方法，其特征在于：所述固定培养基先在30℃的培养箱中暗培养三天，后放在26℃培养室中培养，大约30天左右可见开裂的花药上有愈伤组织。