[发明专利]miR-766-3p和miR-766-5p在制备高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断和鉴别诊断制剂中的应用

说明书

本发明提供一种肿瘤诊断试剂,所述肿瘤诊断试剂能够检测样本中miR‑766‑3p和miR‑766‑5p的表达情况,miR‑766‑3p序列为：actcca gccccacagc ctcagc；miR‑766‑5p序列为:g gaggaattgg tgctggtctt。本发明首先通过miSeq高通量测序技术筛选在颅内淋巴瘤患者，高级别胶质瘤患者和正常对照血清外泌体中miR‑766‑3p和miR‑766‑5p的表达有差异。并在临床标本中采用RT‑PCR检测miR‑766‑3p和miR‑766‑5p的表达，评估miR‑766‑3p和miR‑766‑5p对高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤的诊断和鉴别诊断价值，提出了miR‑766‑3p和miR‑766‑5p在作为颅内淋巴瘤、高级别胶质瘤诊断制剂、诊断试剂盒的应用。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及血清外泌体在肿瘤诊断中的应用，具体涉及miR-766-3p和miR-766-5p在制备高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断和鉴别诊断制剂中的应用。

背景技术

胶质瘤为起源于胶质或前体细胞的肿瘤，是人类最常见的颅内肿瘤之一。按肿瘤细胞在病理学上的恶性程度可以将胶质瘤划分为：低级别胶质瘤（WHOⅠ和Ⅱ级）和高级别胶质瘤（WHOⅢ和Ⅳ级）。高级别胶质瘤为低分化胶质瘤，是高度增殖和侵袭性的肿瘤，具有难治性、易局部播散和易复发等特点，预后极差，生存期短。制定合理的治疗方案延长患者的生存期，离不开准确的诊断。目前胶质瘤诊断的“金标准”是组织学病理活检,然而大部分胶质瘤位于颅内重要部位，且位置深在，而且病理活检手术创伤大，患者及家属常难以接受,因此很难获得病理标本用于诊断。初诊的胶质瘤的诊断主要依靠影像学手段，而影像学诊断面临的主要难题是手术前胶质瘤的鉴别诊断（例如颅内原发淋巴瘤与高级别胶质瘤的鉴别）。寻找高敏感度和高特异度的生物学标志物用于高级别胶质瘤的术前诊断和鉴别诊断刻不容缓。

外泌体(exosomes)是细胞分泌的有双层脂质膜的囊泡，是细胞之间生命活动物质交换的一种重要工具，可通过改变基因调控网络或表观遗传重组来调控生理病理过程。外泌体具有如下特点：（1）特异性：在不同生理或病理条件下，释放到胞外的外泌体的内含物也有所不同。在病理生理状态下细胞应是选择性将miRNA装载入外泌体中，细胞中表达水平低的miRNA，在外泌体中却有很高的表达量。（2）稳定性：由于有双层脂质膜的保护，酶不易消化外泌体的内含物，室温和冻融对外泌体中miRNA的影响甚微。（3）易获取性：现有技术能快速和准确地分离广泛分布于各种类型的体液中的外泌体。（4）易通过血脑屏障：外泌体粒径较小,体内渗透性强，极易透过血脑屏障，即使在一些血脑屏障保持完好的胶质瘤患者血液中，也能检测出胶质瘤细胞的外泌体。因此，外周血外泌体中的miRNA可成为有效地神经系统肿瘤的标志物。基于高通量测序技术及生物信息学方法，可筛选血清外泌体中与肿瘤发生、发展相关循环核酸分子（主要为miRNA）及易感基因，建立miRNA差异表达谱，构建基因调控网络，寻找肿瘤诊断的循环核酸标志物。成熟的RT-PCR技术，可以实现核酸标志物的定量检测，验证评估后用于肿瘤的诊断和鉴别诊断。

发明内容

本发明针对传统高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断和鉴别诊断中存在的问题提出miR-766-3p和miR-766-5p在高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤诊断和鉴别诊断中的应用。

为了达到上述目的，本发明是采用下述的技术方案实现的：

肿瘤诊断试剂,所述肿瘤诊断试剂能够检测样本中miR-766-3p和miR-766-5p的表达情况, miR-766-3p序列为：actcca gccccacagc ctcagc；miR-766-5p序列为:g gaggaattggtgctggtctt。

作为优选，所述肿瘤为高级别胶质瘤和颅内淋巴瘤。

作为优选，肿瘤诊断试剂采用高通量测序方法和/或定量PCR方法检测样本中miR-766-3p和miR-766-5p的表达情况。