[发明专利]在日本血吸虫童虫中高表达的基因及其编码蛋白与应用

说明书

本发明提供在日本血吸虫童虫中高表达的基因及其编码蛋白与应用。本发明利用日本血吸虫全基因组表达谱芯片筛选到一系列在日本血吸虫童虫中高表达的基因，其中基因SjScP27、SjScP80、SjScP84、SjScP88编码的抗原蛋白，能够被血吸虫病病人血清特异性识别，且呈现较强的阳性反应。ELISA检测表明，这些抗原蛋白检测血吸虫具有高敏感性和特异性，可用于日本血吸虫病诊断试剂的开发。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及在日本血吸虫童虫中高表达的基因及其编码蛋白与应用。

背景技术

血吸虫病是一种严重威胁人类健康的传染性寄生虫疾病，主要流行于亚非拉的76个国家和地区，全球有2亿多人受到感染，另有近8亿人受其感染威胁。我国流行的是日本血吸虫病，经过几十年的不懈努力，我国血吸虫病防治工作取得了举世瞩目的成就，血吸虫病在流行地区得到了控制，但实现最终消除血吸虫病的目标依然任重而道远。

诊断是血吸虫病防治领域的中心环节。精确的诊断技术不仅对血吸虫病患者的早发现早治疗具有重要临床意义，还可为血吸虫病流行区等级提供判断标准、为评估流行态势和考核防控效果提供必不可少的信息和科学依据。缺乏高效精确的诊断技术是血吸虫病无法彻底消除的一个重要原因。随着我国血吸虫防治工作力度的加大，血吸虫病在我国趋于一种低度感染的流行趋势。这些轻度感染的血吸虫病患者如果不能及时得到确诊和治疗，其排泄物中所含的虫卵将引起血吸虫病的持续流行传播。因此，研发新的具有高灵敏性和特异性的血吸虫病诊断方法势在必行。

目前，血吸虫病的诊断多依赖于寄生虫形态学检测方法，例如世界卫生组织(WHO)推荐的改良加藤法(Kato-Katz)。这种方法主要通过检查病人粪便或尿液中的血吸虫虫卵来诊断疾病，不但费时费力，而且对轻度血吸虫感染诊断的敏感性较低，不适合用于大规模的血吸虫病现场监测。

相较传统的形态学诊断方法，酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)诊断方法具有操作简便快捷和更高的灵敏性，且可用于大规模现场监测。目前，用于血吸虫病免疫诊断的最常用的抗原是提取血吸虫虫体的成虫抗原组分(Adult worm antigen,AWA)和虫卵抗原组分(Soluble egg antigen,SEA)，由于这两种粗提抗原的成分复杂(由上千种血吸虫蛋白组成)，且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应，血吸虫病诊断的特异性不高，生产的试剂不宜标准化。

发明内容

本发明的目的是提供在日本血吸虫童虫中高表达的基因及其编码蛋白与应用。

本发明构思如下：利用日本血吸虫全基因组表达谱芯片筛选到一系列在日本血吸虫童虫中高表达的基因，童虫是较早接触宿主外周循环的虫体，能够较早地引发宿主体液免疫反应，产生相应的抗体。本发明将其中4个日本血吸虫童虫蛋白基因SjScP27、SjScP80、SjScP84、SjScP88，通过PCR扩增基因亲水区段，并将其在大肠杆菌中重组表达，ELISA试验表明所得重组蛋白用于日本血吸虫病的诊断具有高敏感性和特异性，是潜在的诊断抗原候选靶标。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供在日本血吸虫童虫中高表达的基因，所述基因选自SjScP27、SjScP80、SjScP84、SjScP88中的至少一个，它们的核苷酸序列分别如下：

基因SjScP27：

i)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

ii)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；

iii)在严格条件下与SEQ ID NO:1所示序列杂交且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列，所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜；或