[发明专利]植物作为宿主表达人源端粒酶的应用在审
| 申请号： | 201910549715.5 | 申请日： | 2019-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN110205337A | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 王跃驹;陈书元;唐辉 | 申请（专利权）人： | 王跃驹 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/54;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘颖 |
| 地址： | 美国俄勒冈州，科瓦利斯*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 端粒酶 人源 宿主表达 重组蛋白质生产 生物技术领域 寿命测试结果 秀丽隐杆线虫 农杆菌介导 农杆菌侵染 表达体系 蛋白杂交 平台技术 生物寿命 外源蛋白 延长寿命 有效表达 真空渗透 出端 生菜 成功 应用 生产 | ||
1.植物作为宿主在表达端粒酶中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。
2.一种表达载体，其特征在于，包括端粒酶的序列以及双元植物载体。
3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述端粒酶为人源端粒酶。
4.根据权利要求2或3所述的表达载体，其特征在于，所述端粒酶的序列为将端粒酶的密码子优化为植物偏好的密码子，获得的优化端粒酶的序列。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述优化的端粒酶的序列中核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述优化的端粒酶的序列中氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
6.根据权利要求2至5任一项所述的表达载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：
步骤1：将端粒酶的密码子优化为植物偏好的密码子，获得优化的端粒酶的序列；
步骤2：在所述优化的端粒酶的序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入Sac I位点；克隆到pUC57载体中，获得pTelo克隆载体；
步骤3：通过Xbal/Sacl从步骤2所得的克隆载体中获得基因片段，克隆至双元植物载体pCam35S，获得表达载体p35S-Telo。
7.根据权利要求2至6任一项所述的表达载体在表达端粒酶中的应用。
8.一种植物作为宿主表达端粒酶的方法，其特征在于，将如权利要求2至6任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得端粒酶。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：
步骤1：抽真空25～45s；
步骤2：保持真空(-95kPa)压力30～60s；
步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；
重复上述步骤2～3次，避光处理4d。
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