[发明专利]一种3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-T1142A-C4334A及构建方法有效
| 申请号： | 201910551575.5 | 申请日： | 2019-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN110283835B | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | 程安春;文兴建;汪铭书 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/41 | 分类号： | C12N15/41;C07K14/10;C12N15/85;C12N7/00;A61K39/125;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 张鹏 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 甲肝 病毒 突变 基因 isa t1142a c4334a 构建 方法 | ||
1.一种3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-T1142A-C4334A，其特征在于，所述的突变基因ISA-T1142A-C4334A是分别以3型鸭甲肝病毒强毒株的基因组反转录产物和真核表达质粒pEGFP-C1为模板，采用如下表所示的引物进行扩增并融合所得，所述的3型鸭甲肝病毒强毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V201305；
其中，以所述的基因组反转录产物为模板，使用引物F1-F和T1142A-R、T1142A-F和F1-R分别扩增得到DHAV-3-F1-T1142A-R和DHAV-3-F1-T1142A-F片段，使用引物F2-1-F和F2-1-R、F2-2-F和C4334A-R、C4334A-F和F2-2-R分别扩增得到DHAV-3-F2-1片段、DHAV-3-F2-C4334A-1片段和DHAV-3-F2-C4334A-2片段，使用引物F3-HDVR-F和F3-HDVR-R扩增得到DHAV-3-F3-HDVR片段；以所述的真核表达质粒pEGFP-C1为模板，使用引物pCMV-F和pCMV-R扩增得到pCMV片段，使用引物HDVR-SV40pA-F和HDVR-SV40pA-R扩增得到HDVR-SV40pA片段；再通过融合PCR技术，将DHAV-3-F1-T1142A-F和DHAV-3-F1-T1142A-R片段融合为片段DHAV-3-F1-T1142A，将pCMV和DHAV-3-F1-T1142A片段融合为片段pCMV-F1；将DHAV-3-F2-1片段、DHAV-3-F2-C4334A-1片段和DHAV-3-F2-C4334A-2片段融合为片段F2；将DHAV-3-F3-HDVR和HDVR-SV40pA片段融合为片段F3-HdvRz/SV40pA，将获得的片段pCMV-F1、片段F2和片段F3-HdvRz/SV40pA依次连接构成所述的突变基因ISA-T1142A-C4334A。
2.权利要求1所述的3型鸭甲肝病毒突变基因ISA-T1142A-C4334A在制备3型鸭肝炎病毒疫苗中的应用。
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