[发明专利]诊断结直肠癌的分子组合标志物及检测试剂盒

说明书

诊断结直肠癌的分子组合标志物及检测试剂盒。本发明公开了一种microRNA hsa‑miR‑133a‑3p，hsa‑miR‑145‑5p，hsa‑miR‑1‑3p和hsa‑miR‑378d以及其对应靶基因MLEC，SET，PPIA，YY1作为结直肠癌诊断标志物及其应用，在人结直肠癌组织中表现为显著特异性高表达现象，能够明确清楚地表征结直肠肿瘤的发生。针对联合生物标志物hsa‑miR‑133a‑3p，hsa‑miR‑145‑5p，hsa‑miR‑1‑3p，hsa‑miR‑378d以及其对应靶基因MLEC，SET，PPIA，YY1的表达水平进行大规模检测，可以快速、便捷、准确及灵敏的预测和诊断结直肠癌的发生。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种诊断结直肠癌的分子组合标志物、对应靶基因及检测试剂盒。

背景技术

结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，居西方国家癌症相关死亡的第二大原因。CRC肿瘤发生的机制是由染色体不稳定性和微卫星不稳定性引起的原癌基因和抑癌基因的遗传改变的累积，导致基因表达改变。而基因表达在不同的层面上受到严格的调控，在转录后调控水平上研究基因表达对深入研究结直肠癌发生发病机理具有十分重要的临床意义。

microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子，通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达。miRNA通过调控基因的表达广泛参与机体生长、发育和疾病发生等各种生命过程。miRNA与多种细胞癌变的关系极为密切，根据miRNA的表达特征可以划分人类癌症并区分正常细胞和癌细胞，甚至能够鉴别出那些从外形上无法确定的癌细胞，用于癌症的诊断。研究表明，结直肠癌患者中一些已知的组织特异性miRNA，如let-7、miR-9、miR-17、miR-19、miR-21、miR-24和miR-155的下调，可作为CRC患者潜在的诊断和治疗生物标志物。

选择性多聚腺苷酸化是一种重要的转录后调控机制，被认为在包括结直肠癌在内的许多类型癌症中参与调解癌症相关基因的表达。选择性多聚腺苷酸化在不改变mRNA编码序列的情况下，使mRNA的3’UTR长度发生改变，可以产生更短的3'UTR，消除miRNA结合位点，使mRNA失去miRNA的抑制作用。选择性多聚腺苷酸化与miRNA表达在结直肠癌肿瘤组织与正常组织中存在显著差异，检测结直肠癌肿瘤不同分期、类型的个体中mRNA的多聚腺苷酸现象及相关miRNA表达水平，对在转录后调控尺度上研究结直肠癌的发生机制具有重要意义，也是结直肠癌诊断和靶向治疗的有效方式和重点方向之一。

目前关于结直肠癌的分子诊断标志物大多为基因表达、DNA甲基化、非编码RNA表达等。公告号为108949985B的已授权专利公开了一种环状RNA circ-WHSC作为结直肠癌诊断生物标志物的应用。公告号为106872590B的已授权专利公开了一种液相色谱串联质谱法检测组织亚油酸含量及4个亚油酸通路相关基因表达作为结直肠癌诊断生物标志物的应用。

从精准医学角度分析，现有的肿瘤诊断方式由于缺乏诊断标志物和靶点基因，导致其灵敏性和特异性较低。

从全基因组范围联合microRNA和选择性多聚腺苷酸化的测序数据精准筛选诊断标志物的方法尚未见报道。

目前关于多聚腺苷酸化相关的microRNA hsa-miR-133a-3p，hsa-miR-145-5p，hsa-miR-1-3p和hsa-miR-378d以及其对应靶基因MLEC,SET,PPIA,YY1作为结直肠癌发生及转移的联合诊断标志物尚未见报道。

因此，本领域的技术人员致力于基于microRNA hsa-miR-133a-3p，hsa-miR-145-5p，hsa-miR-1-3p和hsa-miR-378d以及其对应靶基因MLEC,SET,PPIA,YY1作为结直肠癌诊断标志物，在人结直肠癌组织中表现为显著特异性高表达现象，能够明确清楚地表征结直肠肿瘤的发生。

发明内容