[发明专利]一种利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法

权利要求书

1.一种利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）番茄离体叶片采集：种植不同材料番茄，待生长至5~6叶期，剪取生理状态一致的植株新叶大小5~7cm的叶片，用洗洁精水漂洗2 min后，用自来水冲洗干净，再用无菌水漂洗2次，备用；

（2）叶霉病病原菌培养和孢子悬浮液配制：从本地番茄田间典型发病植株采集叶霉病叶在PDA培养基分离纯化获得番茄叶霉病病原菌，并置于23℃恒温培养箱中培养；将培养25~28天的成熟菌落，加无菌水用涂布棒刮擦菌落，双层纱布过滤，10000 r/min 离心 2min 沉淀孢子，弃上清液，加无菌水，用血球计数板计数，配制成5×10⁶浓度的孢子悬浮液；

（3）离体番茄叶片孢悬液接种法：

将上述备用的番茄离体叶片在含叶霉病病原菌孢子5×10⁶浓度的孢子悬浮液中浸泡30min ，然后取出放置于铺有保湿滤纸的瓷盘内，用灭菌的含有0.2g/L苯并咪唑的湿脱脂棉包裹接种叶柄保湿，并用透明的保鲜膜封严瓷盘进行保湿培养，置于光照培养箱中，模拟田间光照及温度条件：23~28℃，光照3h；28~30℃，光照3h；23~28℃，光照5h；15~23℃，黑暗13h，每天换气和适当补湿，使培养箱中相对湿度保持在85 %以上；

（4）接种后发病情况调查:

接种后10天观察每片叶病斑面积和菌丝层，根据离体叶片病情分级标准进行调查；

病情分级标准：

0级：无症状；

1级：叶面出现褪绿及黄色病斑，病斑面积小于全叶面积的10%；

3级：病斑上产生一薄层稀疏霉层，病斑面积占全叶的10 %～2 5 %；

5级：有明显霉层，病斑面积占全叶的2 5 ～ 5 0 % ；

7级：产生浓密霉层，病斑处发黑，病斑面积占全叶的5 0 %～75 % ；

9级：病斑面积占全叶的75 %以上；

以病情指数作为衡量病害严重程度的评价指标

材料抗性划分标准：

。

2.权利要求1所述的利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法，其特征是：步骤（2）中病原菌的品种是：褐孢霉Fulvia fulva（Cooker）Ciferri。

3.权利要求1所述的利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性的方法，其特征是：步骤（2）中的叶霉病病原菌是从番茄田间典型发病植株采集叶霉病叶经分离纯化后活的菌株。

4.权利要求1所述的利用离体叶片鉴定番茄叶霉病抗性方法在快速准确鉴定出不同番茄材料对叶霉病抗性方面的应用。