[发明专利]一种生产迷迭香酸的菌株及方法

权利要求书

1.一种能够以酚酸为底物合成迷迭香酸的重组细胞或者重组细胞的组合，其特征在于，所述酚酸是丹参素和咖啡酸，所述迷迭香酸包括D-迷迭香酸、L-迷迭香酸，所述重组细胞表达了4-香豆酸辅酶A连接酶、Coffeacanephora或Dianthus caryophyllus来源的迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II；所述重组细胞的组合包含分别表达4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-II、多聚磷酸盐激酶2-I中的一种或以上的重组细胞，由这多个重组细胞共同配合以实现合成迷迭香酸的目的；

编码所述多聚磷酸盐激酶2-I的基因在NCBI上accession NO. 为NC_003047 REGION:complement 564142..565044，对应的氨基酸序列是NP_384613.1，

编码所述多聚磷酸盐激酶2-II的基因在NCBI上accession NO. 为AB092983 REGION:339..1766，对应的氨基酸序列是BAC76403.1，

所述重组细胞选择大肠杆菌为宿主，是Escherichia coli BL21（DE3）。

2.根据权利要求1所述的一种能够以酚酸为底物合成迷迭香酸的重组细胞或者重组细胞的组合，其特征在于，4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II在宿主中借助载体进行共表达或整合到宿主基因组中进行表达；4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II借助载体进行表达时，选择多个载体，每个载体表达4种酶中的一种或多种，或者，选择一个载体，由一个载体同时表达这4种酶。

3.根据权利要求2所述的一种能够以酚酸为底物合成迷迭香酸的重组细胞或者重组细胞的组合，其特征在于，将编码4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II的基因分配到pETDuet-1、pACYCDuet-1、pRSFDuet-1、pCDFduet-1这4种质粒中的一种或多种上，每种质粒上携带编码4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II的基因中1种基因或多种。

4.根据权利要求1或2所述的一种能够以酚酸为底物合成迷迭香酸的重组细胞或者重组细胞的组合，其特征在于，所述重组细胞表达了Coffeacanephora或Dianthus caryophyllus来源的编码迷迭香酸合成酶的基因，以及编码多聚磷酸盐激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-Ⅱ、4-香豆酸辅酶A连接酶的基因；所述重组细胞以大肠杆菌为宿主，以pRSFDuet-1为载体表达编码多聚磷酸盐激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-Ⅱ的基因，以pTDuet-1为载体表达编码4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶的基因；编码4-香豆酸辅酶A连接酶、迷迭香酸合成酶、多聚磷酸激酶2-I、多聚磷酸盐激酶2-II的基因前均包含T7启动子和RBS结合点，基因后带有T7终止子。

5.一种全细胞催化生产迷迭香酸的方法，其特征在于，是利用权利要求1~4任一所述的重组细胞或者重组细胞的组合为全细胞催化剂，以丹参素和咖啡酸为底物合成迷迭香酸。

6.根据权利要求5所述的一种全细胞催化生产迷迭香酸的方法，其特征在于，所述全细胞催化剂的制备，是培养、繁殖重组细胞或者重组细胞的组合，并使得重组细胞或者重组细胞的组合表达所述4种酶，然后收集重组细胞。

7.权利要求1~4任一所述的重组细胞或者重组细胞的组合在生产迷迭香酸或者含有迷迭香酸的产品或者以迷迭香酸为前体的物质中的应用。