[发明专利]两系不育系水稻育性转换有效低温累积效应的鉴定方法

权利要求书

1.一种两系不育系水稻育性转换有效低温累积效应的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)待测两系不育系水稻播种后进行常规大田肥水管理，生长发育到幼穗分化期第Ⅳ期，即雌雄蕊形成期，将其挖蔸移栽进行后续处理；

(2)有效低温累积值的鉴定：Tc表示两系不育系水稻的不育起点温度，T_Δ表示有效低温值；将步骤(1)的待测两系不育系水稻在温度T1下处理t1时长，在温度T2下处理t2时长，其中，温度T1＞Tc，温度T2＜Tc，T2＝Tc-T_Δ，在0～10℃设置若干个T_Δ处理梯度；在每个T_Δ处理梯度内设置不同时长的t2处理梯度，且t1+t2+n＝24h，其中，n为0～12h间的任意时长，以T_Δ＝0为对照，T_Δ处理梯度和梯度之间的温度间隔、t2处理梯度均可根据需要进行设置；

通过计算公式为计算有效低温累积值，其中d为处理天数；

(3)有效低温累积效应的响应天数的鉴定：按照步骤(2)的T_Δ处理梯度设置或在其中选择若干个待考察的T_Δ处理梯度，在每个T_Δ梯度内分别设置若干不同处理天数的处理组，对步骤(1)的待测两系不育系水稻进行处理，以T_Δ＝0为对照，处理天数和处理天数之间的间隔时长均可根据需要进行调整；

步骤(2)和步骤(3)的顺序可调整；

(4)将经步骤(2)和(3)处理后的两系不育系水稻移回大田继续生长，分别进行幼穗花粉育性调查，所述的幼穗花粉育性调查包括花粉育性镜检获得花粉可染率、不育系套袋自交结实率鉴定；

所述的不育起点温度Tc可通过文献资料报道获得，或者通过如下方法获得在特定光长下精准的不育起点温度Tc：

在特定光长下设置至少4个处理温度梯度，分别进行至少4天的光温处理，处理结束后分别进行幼穗花粉育性调查，花粉育性镜检的花粉可染率≤0.5％，套袋自交结实率≤0.5％，所对应的最高温度为该不育系的不育起点温度，从而获得所述的两系不育系水稻在特定光长下的精准不育起点温度；

步骤(3)中所述的处理组的样品数为至少6株；

所述的花粉育性镜检获得花粉可染率的具体步骤为：每天上午取当天即将开花的小穗的上中下各2个颖花，共6个颖花制片；将花药混合置于载玻片上，用镊子轻轻捣碎，滴一滴10g·L^-1浓度的碘-碘化钾溶液染色，去掉药壁后盖好盖玻片，用吸水纸吸去多余的碘-碘化钾溶液；置于10×10倍显微镜下观察，取3个代表性视野观察花粉粒的形状和染色反应，计数每个视野内的花粉可染率；

不育系套袋自交结实率鉴定的具体步骤为：取样后的单穗摘去已开花的颖花，然后进行套袋，让其继续生长自交结实，14天后去掉纸袋，分别统计其自交结实情况：结实率＝每穗结实数/每穗总粒数×100％。

2.根据权利要求1所述的两系不育系水稻育性转换有效低温累积效应的鉴定方法，其特征在于，所述的处理温度梯度为4～13个处理温度梯度；

每个处理温度梯度的样品数量至少为6株；

步骤(4)中所述的花粉育性镜检获得花粉可染率在抽穗开花后进行，所述的不育系套袋自交结实率鉴定在套袋后14天进行。

3.根据权利要求1所述的两系不育系水稻育性转换有效低温累积效应的鉴定方法，其特征在于，在特定光长11.5h、12.5h、13.5h、14.5h的光温处理设置分别如下所示：

所述的花粉育性镜检在抽穗后连续3天进行。

4.根据权利要求1所述的两系不育系水稻育性转换有效低温累积效应的鉴定方法，其特征在于，所述的特定光长为13.5h；

步骤(2)中所述的T_Δ处理梯度设置为T_Δ＝1.0℃、1.5℃、2.0℃、2.5℃、3.0℃、3.5℃、4.0℃；

步骤(2)中所述的t2处理梯度设置为7h、9h、11h、13h、15h、17h；

步骤(3)中所述的处理在自然光照条件下进行。