[发明专利]一种南极磷虾中的富脂蛋白、应用、分离及检测方法

说明书

本公开属于富脂蛋白提取技术领域，具体涉及一种南极磷虾中的富脂蛋白、应用、分离及检测方法。富脂蛋白是一种蛋白‑脂质复合物，能够降低体内脂质含量，提高代谢水平的作用。南极磷虾储量巨大，经研究证实，南极磷虾中的富脂蛋白能够限制改善由于高胆固醇饮食引发的高胆固醇血症的大鼠的血脂情况，可应用于降血脂、降糖功效的保健品开发。本公开提供了一种南极磷虾中富脂蛋白的提取方法，通过等电点沉淀配合超声提取，再通过凝胶柱色谱分离得到南极磷虾中的富脂蛋白。该方法简便易行，得到的富脂蛋白纯度高，且较为集中，应用于保健品和药品的加工可以节约后续加工工艺。

技术领域

本公开属于富脂蛋白提取技术领域，具体涉及一种针对南极磷虾中富脂蛋白的提取分离方法、该方法得到的富脂蛋白、应用，以及针对该富脂蛋白的检测方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

富脂蛋白，是一种蛋白-脂质的复合物，在动物体内，富脂蛋白参与脂类的运输、膜蛋白的形成、越冬抗寒等众多方面的调节，对维持基本的生理功能具有重要作用。人体血清富脂蛋白组分和含量的变化对人体健康具有重要影响，同时大量的动物实验证明，富脂蛋白能够降低体内总胆固醇和低密度脂蛋白的含量，促进蛋白质、碳水化合物、脂质代谢，具有显著的降血脂和降血糖的功效，能够保护神经系统、肝脏和心血管系统。

南极磷虾(Euphausia superba)，生活在南极洲的南冰洋水域，是南极洲生态系统的重点物种，为鲸鱼、海豹、企鹅等提供了重要的食物来源。南极磷虾储量巨大，并多以群居方式生活，易采集捕捞。南极磷虾含有丰富的脂类和高质量的蛋白质，具有巨大的应用价值。徐文思等人研究了南极磷虾中富脂蛋白的降胆固醇和降血糖的活性，对患高胆固醇血症的大鼠喂饲南极磷虾富脂蛋白，四周后测大鼠血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(L-DLC)、高密度脂蛋白胆固醇(H-DLC)和葡萄糖(Glu)含量变化情况，结果表明南极磷虾富脂蛋白具有降低高胆固醇大鼠血浆中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的作用，并可缓解高胆固醇饮食引起的模型大鼠高密度脂蛋白胆固醇的持续下降的症状，脂蛋白的摄入也可以抑制由于高胆固醇饮食导致的模型大鼠中葡萄糖水平的持续增加(徐文思,2015)。基于上述的研究结果，对南极磷虾富脂蛋白进行提取分离检测，分析其蛋白和脂质的成分，研究脂质和蛋白的结合特点，有利于分析不同富脂蛋白可能对南极磷虾生理活动产生的影响以及通过提取富脂蛋白中的功能性产品如高密度脂蛋白等研发南极磷虾新型保健品。

目前等电点沉淀法是提取水产动物蛋白常用的方法，如Wang等公开了等电点沉淀法提取的南极磷虾蛋白的方法，其油脂的含量高达33.01％；徐文思等公开了南极磷虾富脂蛋白中脂质的成分。对于富脂蛋白的分离方法主要有超速离心法和化学沉淀法，其中超速离心过程中的定量操作麻烦且困难，且所需的样品量很大，化学沉淀法具有样本用量少、不需要特殊的仪器设备、成本小、操作简便等优点，但准确性较低，此外分离富脂蛋白的方法还有凝胶过滤法、高压液相层析法等。如李毅平等人公开了越冬松针瘿蚊幼虫整体携脂蛋白分离和纯化的方法，关雪辰等人公开了对粘虫幼虫血淋巴富脂蛋白分离鉴定以及理化性质分析的结果，但所述方法仍存在前处理较为繁琐等缺点。富脂蛋白的常用检测方法有电泳法、试剂盒法、高效液相色谱法、凝胶色谱法、动态光散射法、质子核磁共振光谱法，以及微流控芯片电泳分离法等。

发明内容

依据现有研究结果，南极磷虾中的富脂蛋白具有良好降胆固醇和降血糖活性，应用于降脂功效的药物及保健品开发具有良好的开发意义。在此基础上，提供一种更为简便的制备和检测方法对于富脂蛋白的提取和相关产品的开发具有重要意义。

为了实现上述技术效果，本公开提供以下技术方案：

本公开第一方面，提供一种南极磷虾中富脂蛋白的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：向南极磷虾中加入碱液超声提取，获取液体部分；向液体部分加入酸液调节pH值，收集沉淀部分；将沉淀部分通过凝胶柱层析分离获得所述富脂蛋白。