[发明专利]鹰嘴豆芽素A对海马神经元细胞的保护作用

权利要求书

1.鹰嘴豆芽素A对海马神经元细胞的保护作用，其特征在于：鹰嘴豆芽素A对过氧化氢诱导大鼠原代海马神经元损伤的作用。

2.按照权利要求1所述鹰嘴豆芽素A对海马神经元细胞的保护作用，其特征在于：取新生24小时内大鼠海马神经元细胞，进行原代细胞培养，镜下观察细胞生长状态，培养10天，加入神经元特异性抗体MAP-2，荧光鉴定神经元细胞纯度，以不同浓度梯度的Bio A或不同浓度梯度的H₂O₂刺激海马神经元24h，CCK8法观察Bio A对海马神经元细胞活力的影响，将培养的原代海马细胞分为正常组、H₂O₂组、Bio A低中高三个剂量组，根据筛选出的Bio A最佳作用浓度给予三个剂量组，药物作用24h后，除正常组外，其余组给予筛选出的H₂O₂最佳作用浓度造模12h，用CCK8法观察Bio A对H₂O₂诱导海马神经元细胞活力的影响；利用流式细胞术，观察Bio A对海马神经元细胞凋亡和胞内活性氧的影响，提取细胞总蛋白，WesternBlot法测定Bcl-2、Bax、Casepase-3蛋白表达水平；培养至第10d的海马神经元用神经元特异性抗体MAP-2荧光检测海马神经元纯度，结果显示，在荧光相差显微镜下，海马神经元胞体和突触呈现绿色荧光，细胞核呈现蓝色荧光，经鉴定，纯度可达98％以上；以不同浓度梯度的Bio A或不同浓度梯度的H₂O₂刺激海马神经元24h，结果显示，Bio A在10^-7-10^-4mol/L浓度范围内可以不同程度促进神经细胞的增殖，其中在10^-5mol/L浓度附近，增殖作用最为显著；与正常对照组相比，100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L H₂O₂分别使细胞活力大约下降10％、20％、45％和89％，呈现明显的剂量依赖性；CCK8法观察Bio A对H₂O₂诱导海马神经元细胞活力的影响，结果显示，与H₂O₂组相比，Bio A预处理组能显著抑制H₂O₂作用引起的海马神经元损伤，其中Bio A高剂量组作用明显；流式细胞术观察Bio A对H₂O₂所致海马神经元ROS的影响，结果显示，与正常对照组比较，H₂O₂组DCF荧光明显增强，提示细胞内ROS水平升高，Bio A处理组能明显降低细胞内ROS水平；流式细胞术观察Bio A对H₂O₂所致海马神经元凋亡的影响，结果表明，正常对照组在收集过程中出现部分细胞损伤，有少许凋亡和坏死细胞存在。H₂O₂损伤后，凋亡细胞数和坏死细胞数明显增加，给予Bio A预处理后，可明显减少H₂O₂引起的凋亡和坏死细胞数；Western Blot方法观察Bio A对海马细胞中Bcl-2、Bax和Casepase-3蛋白表达的影响，结果所示，与正常对照组比较，模型组细胞Bcl-2蛋白表达下调，Bax、Casepase-3蛋白表达上调；Bio A作用后可剂量依赖性地上调模型细胞Bcl-2蛋白表达，下调Bax、Casepase-3蛋白表达。