[发明专利]鹰嘴豆芽素A的神经保护作用

权利要求书

1.鹰嘴豆芽素A的神经保护作用。

2.按照权利要求1所述鹰嘴豆芽素A的神经保护作用，其特征在于：所述鹰嘴豆芽素A通过对生长激素JAK/STAT信号通路的调控机制起到神经保护作用。

3.按照权利要求1所述鹰嘴豆芽素A的神经保护作用，其特征在于：以不同浓度梯度的GH刺激海马神经元24h，CCK8法观察GH对海马神经元细胞活力的影响，根据筛选出的BioA和GH的最佳作用浓度单独或联合作用海马神经元24h后，用CCK8测定单独或联合用药对海马神经元细胞活力的影响，观察两药合用是否具有协同作用。选取不同浓度的GH或不同的作用时间刺激海马神经元细胞，提取细胞总蛋白，测定细胞中STAT5和P-STAT5蛋白的表达，筛选GH合适的作用浓度及作用时间。选取不同浓度的Bio A或不同的作用时间刺激海马神经元细胞，提取细胞总蛋白，测定细胞中SOCS2蛋白的表达，筛选Bio A合适的作用浓度及作用时间，根据筛选出的Bio A和GH的最佳作用浓度和作用时间单独或联合刺激海马神经元，提取细胞总蛋白，测定细胞中STAT5、P-STAT5和SOCS2蛋白的表达。以10^-8mol/L Bio A作用海马神经元60min，运用RT-PCR和Western Blot方法测定细胞中SOCS1、SOCS2、SOCS3 mRNA和蛋白的表达；以不同浓度GH作用海马神经元细胞，24h后测定细胞活力，结果显示，GH在5-250ng/ml浓度范围内对细胞无毒性，其中在125ng/ml浓度附近，对海马神经元有一定的促增殖作用，浓度再大，药物开始出现细胞毒性，细胞活力下降，以125ng/ml GH和10^-5mol/LBio A单独或联合刺激海马神经元，24h后测定细胞活力，结果显示，合用药比单用药更能促进海马神经元细胞增殖，根据金正均法计算q>1.15，提示两药合用具有协同作用，运用Western Blot方法测定不同浓度、不同时间的GH刺激海马神经元后STAT5和P-STAT5的蛋白表达或测定不同浓度、不同时间的Bio A刺激海马神经元后SOCS2的蛋白表达，结果显示，GH在5ng/ml，作用60min时，细胞STAT5和P-STAT5蛋白的表达差异最明显，遂确定GH的作用浓度和作用时间。Bio A在10^-8mol/L，作用60min时，细胞SOCS2蛋白的表达差异最明显，遂确定Bio A的作用浓度和作用时间。以10^-8mol/L Bio A和5ng/ml GH单独或联合作用海马神经元60min，Western Blot方法测定STAT5、P-STAT5和SOCS2蛋白表达，结果显示，Bio A和GH联合给药可明显增加STAT5、P-STAT5蛋白表达水平，尤其是Bio A比GH提前60min处理给药比同时给药更能引起STAT5、P-STAT5蛋白表达水平的上调；能够下调SOCS2蛋白表达水平；以10^-8mol/L Bio A作用海马神经元细胞60min后，提取细胞RNA和总蛋白，测定SOCS1、SOCS2、SOCS3 mRNA和蛋白的表达水平，结果显示，与对照组比较，SOCS1、SOCS2、SOCS3 mRNA基本变化不大，SOCS2蛋白表达明显下调，而对SOCS1和SOCS3蛋白表达无影响。