[发明专利]一种评价外源dsRNA对南方小花蝽影响的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种评价外源dsRNA对南方小花蝽影响的方法及其应用，上述方法为：把外源dsRNA均匀混入饲料中后直接饲喂南方小花蝽，观察饲喂过程中南方小花蝽的生物学变化，并辨别成虫雌雄，用以评价外源dsRNA对南方小花蝽影响。本发明提供的评价方法建立在以植物为介导的RNAi转基因棉花对非靶标生物影响的安全评价基础之上，可以根据需求使用dsRNA的量使南方小花蝽暴露在适合浓度的dsRNA，且方法简单，适用性强，可以为转基因棉花安全评价提供可靠的依据。

技术领域

本发明涉及昆虫分子生物学技术领域，尤其涉及一种评价外源dsRNA对南方小花蝽影响的方法及其应用。

背景技术

随着转基因棉花种植面积不断的扩大，其发展也面临着各种挑战，单一抗性的转基因棉花虽然有效的防治了棉铃虫危害，但在农药使用不断减少的情况下盲蝽类害虫的种群数量急剧增加，逐渐上升为主要害虫；且棉铃虫对Bt棉的抗性也逐渐增强且Bt棉特异性不强，容易对非靶标生物造成影响；靶标害虫的抗性不断增强等问题。因此新技术的发展和运用对当前转基因棉花的发展十分重要。

RNAi在基因功能研究、基因治疗、新药物的研究等方面都被广泛应用，在转基因领域RNAi也被开发利用，RNAi类转基因植物通过植物表达特定双链RNA的转基因植物以沉默相应害虫的关键基因达到防治害虫的目的。与传统的转基因作物相比，利用植物为介导表达dsRNA的RNA干扰技术特异性高、成本低、更加环保友善，在改善植物品质和害虫防治中均有良好的应用前景

与传统的Bt转基因作物相同，RNAi生物技术作物也要面临潜在的环境风险，能否稳定地遗传、在生态系统中的竞争能力、基因飘逸、对其他非靶标生物的影响等都需要经过完善的风险评估。由于RNAi植物的特异性，其是否会沉默目标基因外的其他基因一直是重点考察的方面，如果靶标害虫的目标基因与环境中其他昆虫的同源性十分高时就很有可能发生非期望基因被沉默的情况。随着基因组数据测序的不断发展，人工合成dsRNA，设计科学合理的喂食实验为测定非靶标基因是否被沉默提供可靠的依据。

南方小花蝽，属半翅目昆虫花蝽科，是我国独有的天敌昆虫，南方小花蝽是棉田生态系统中一种重要的捕食性天敌，其若虫和成虫均可以捕食棉田中的蓟马、棉蚜、螨虫以及棉铃虫、棉红铃虫等多种鳞翅目害虫的卵和初孵幼虫，且南方小花蝽在棉田中的自然种群数量较大，在棉田生态系统中占据重要的位置。南方小花蝽与其捕食的几种重要害虫以及花粉是棉田生态系统中的几个十分关键的环节，且南方小花蝽有取食花粉的习性，会直接取食外源dsRNA表达量较高的花粉，因此在对转基因棉花进行生物安全评价时，天敌昆虫南方小花蝽是十分重要的非靶标评价生物。

在评价外dsRNA对南方小花蝽影响时，一般以对南方小花蝽最大暴露量的10倍以上的外源dsRNA来喂南方小花蝽，直接使用转基因植物花粉无法达到上述要求。

发明内容

针对上述问题，现提供一种评价外源dsRNA对南方小花蝽影响的方法及其应用，该方法建立在RNAi类转基因棉花对非靶标生物影响的安全评价基础之上，并可根据需求使用dsRNA的量使南方小花蝽暴露在适合浓度的dsRNA下。

具体技术方案如下：

本发明的第一个方面是提供一种评价外源dsRNA对南方小花蝽影响的方法，具有这样的特征，把外源dsRNA均匀混入饲料中后直接饲喂南方小花蝽，观察饲喂过程中南方小花蝽的生物学变化，并辨别成虫雌雄，用以评价外源dsRNA对南方小花蝽影响。

上述的方法，还具有这样的特征，把外源dsRNA均匀混入饲料中后直接饲喂3龄南方小花蝽10-15天，待南方小花蝽生长至成虫后喂食豆蚜，观察饲喂过程中南方小花蝽的生物学变化，并辨别成虫雌雄，用以评价外源dsRNA对南方小花蝽影响。