[发明专利]筛选P53PTC通读协同抗肿瘤药物的方法

说明书

本发明提供了一种筛选P53^PTC通读协同抗肿瘤药物的方法，包括：以含有p53^PTC‑GFP融合载体的E.coli系统初筛出候选化合物；以及利用舜转或者稳转的H1299^p53PTC‑GFP细胞对候选化合物进行二次筛选。通过这种筛选方法发现G418不仅可以通读p53^PTC，而且与抗肿瘤药物DOX具有协同作用，这为降低临床使用药物的毒性提供了一种新的途径。

技术领域

本发明涉及药物领域，更具体地，涉及筛选P53^PTC通读协同抗肿瘤药物的方法。

背景技术

p53蛋白作为肿瘤抑制因子在癌症预防中起着重要作用。突变型p53蛋白经常引发细胞癌变，癌细胞转移、增殖和存活。在p53突变中，PTCs与p53^PTC蛋白高度相关。PTCs导致合成截短的p53蛋白(p53^PTC蛋白)，而p53^PTC蛋白无抑制癌细胞增殖的功能。研究发现癌细胞中有60％超过了15个p53PTC突变。因此，通过回复突变p53^PTC来促进细胞周期阻滞是一种可行的抗癌策略。

目前为止，很少有化合物能够通过蛋白质合成机制通读mRNA终止密码子，包括p53^PTC。在这些化合物中，包括庆大霉素、geneticin和kanamycin在内的氨基糖苷类比其它化合物更能有效地增强p53^PTC的通读效应。这些氨基糖苷类化合物减少了同源和类同源tRNA之间的分子区别，并可通过在终止密码子处插入一个氨基酸以继续翻译。除提高此类化合物的通透效率外，我们但仍需探索新的化合物，加速发现治疗p53^PTC突变体癌症有效治疗新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选P53^PTC通读协同抗肿瘤药物的方法，以促进抗肿瘤药物的发现。

本发明的实施例提供了一种筛选P53^PTC通读协同抗肿瘤药物的方法，包括：

以含有p53^PTC-GFP融合载体的E.coli系统初筛出候选化合物；以及

利用舜转或者稳转的H1299^p53PTC-GFP细胞对候选化合物进行二次筛选。

本申请提供了一种高效的p53^PTC蛋白通读化合物筛选策略，首先以含有p53^PTC-GFP融合载体的E.coli系统高通量初筛出候选化合物，然后利用舜转或者稳转的H1299^p53PTC-GFP细胞对候选化合物进行二次筛选。此外，通过这种策略我们发现G418不仅可以通读p53^PTC，而且与抗肿瘤药物DOX具有协同作用，这为降低临床使用药物的毒性提供了一种新的途径。

附图说明

图1a示出了p53-GFP融合蛋白的表达情况。

图1b示出了用His单克隆抗体通过Western-blot方法检测全长p53^R213X蛋白的表达，其中，FL：全长p53蛋白；TR：截断p53蛋白。

图2a示出了p53^WT-GFP融合蛋白的瞬时表达引起细胞形态变化。

图2b示出了G418显著提高全长p53蛋白的产量，其中，p53^WT-GFP融合蛋白为对照。

图2c示出了p53^R213X-GFP稳态表达细胞株筛选。

图2d示出了4号p53^R213X稳态表达细胞检测庆大霉素、卡那霉素和G418的通读效率，其中，氨苄青霉素为对照。