[发明专利]一种肌红蛋白检测试剂盒

说明书

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其是一种肌红蛋白检测试剂盒，使用胶乳增强免疫比浊法，包括试剂R1、R2，试剂R1为标记了肌红蛋白特异性抗体的胶乳颗粒溶于缓冲液中形成，试剂R2为缓冲液，胶乳颗粒在缓冲液中的浓度为55‑90ng/L，胶乳颗粒的粒径为46‑77nm，胶乳颗粒与肌红蛋白特异性抗体的质量比为7：4‑9。本试剂盒用于体外定量检测人血清中肌红蛋白（Mb）的含量。适用于心肌损伤等疾病辅助诊断，并指导临床治疗。且稳定性良好，制备简单，适合推广使用。

技术领域

本发明涉及蛋白检测技术领域，尤其涉及一种肌红蛋白检测试剂盒。

背景技术

肌红蛋白存在于肌肉中，心肌中含量特别丰富，肌红蛋白是目前肌红蛋白更是检测急性心肌梗死(AMI)的早期指标，在AMI后1-2小时，在患者血清中的浓度即迅速增加，6-9h达到高峰。一旦患者诊断为AMI且已进行相应治疗，主要的是进一步评价患者在住院期间是否有并发症及再梗死。此时用肌钙蛋白可能是不适宜的，因为疾病发作后肌钙蛋白的长期释放模式可能掩饰发生额外新的损伤。而肌红蛋白在发作后第一天内即返回到基线浓度，当有再梗死时，则又迅速上升，形成多峰现象，可以反映局部缺血心肌周期性自发的冠脉再梗塞和再灌注。

肌红蛋白测定方法很多，其敏感性和特异性不同。分光光度法是1963年Reynafarje等首先建立，将待测肌红蛋白转变为CO化合物，测其中两个最大吸收峰(538nm,568nm)，计算肌红蛋白含量，但敏感度较差，故仅适用于含量较高标本的检测。用HPLC法测定血清或尿肌红蛋白最低检测限为2mg/L，线性范围为20~3000mg/L。但需特殊设备，不适合中、小型医院开展。超滤法在测定肌红蛋白回收率时出现高度差异，而免疫检测法不受尿中其它蛋白质或颗粒性物质的影响，并且能准确地测定尿中肌红蛋白含量。用超滤-浸渍片法定性地检测尿肌红蛋白，对肌红蛋白继发肾功能障碍的患者可能造成误诊，特别是在尿肌红蛋白＜60000μg/L时。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种肌红蛋白检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种肌红蛋白检测试剂盒，应用于胶乳增强免疫比浊法，包括试剂R1、R2，试剂R1为标记了肌红蛋白特异性抗体的胶乳颗粒溶于缓冲液中形成，试剂R2为缓冲液，胶乳颗粒在缓冲液中的浓度为55-90ng/L，胶乳颗粒的粒径为46-77nm，胶乳颗粒与肌红蛋白特异性抗体的质量比为7：4-9。

优选的，其使用方法为：利用样品中肌红蛋白抗原与试剂中相应的肌红蛋白抗体乳胶颗粒结合后，使乳胶颗粒发生凝集反应，并形成一定浊度，通过与同样处理的校准液比较，可计算未知样品中的肌红蛋白含量。

优选的，缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、氯化铵缓冲液以及其他具有相似性质的缓冲液中的一种或几种。

优选的，试剂R1制备方法如下：将肌红蛋白特异性抗体与乳胶颗粒偶联，然后加入200-220mmol/L的缓冲液中，2500rpm离心4h去上清，再用缓冲液稀释至0.55%。

优选的，胶乳颗粒的平均粒径为0.1-0.4μm。

优选的，试剂R1中添加有防腐系统，防腐系统为叠氮钠、庆大霉素、两性霉素中的任意一种或者任意一种以上的组合，叠氮钠的终使用浓度为质量百分比浓度0.01-0.5%，庆大霉素的使用浓度为3-15mg/l，两性霉素终使用浓度为1-3mg/l。

优选的，试剂R1中添加有稳定系统，稳定系统选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或者几种，其质量浓度为0.5-10％。

优选的，试剂R1中添加有表面活性剂，表面活性剂是曲拉通100或Thesit。