[发明专利]茯苓中核苷含量的检测方法

说明书

本发明公开了茯苓中核苷含量的检测方法，其包括以下步骤：以栀子苷为内标，通过高效液相色谱检测茯苓供试品溶液中核苷的含量即可。本发明对茯苓中的尿苷、鸟苷和腺苷的检测方法测得的各核苷的含量较高，可有效的对茯苓标准汤剂和茯苓配方颗粒进行质量控制，并且采用了内标法对茯苓供试品溶液中的各核苷的含量进行高效液相色谱的检测，采用外标一点法对茯苓供试品溶液中的各核苷的含量进行计算，测量的误差较小，操作简单、稳定、重现性好、检测效率高，具有较强实用性。

技术领域

本发明涉及茯苓中核苷含量的检测方法。

背景技术

茯苓(Poria cocos(Schw.)Wolf)是临床应用历史悠久的常用中药。为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核，味甘、淡，性平，具有利水渗湿、健脾宁心之功效，中医有“十药九茯苓”之说。

中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提取、浓缩、干燥、制粒而成，在中医临床配方后，供患者冲服使用。由于配方颗粒已失去中药饮片的外在形态特征，因此其质量控制与标准制定尤为重要和关键，建立的相应质量标准务求能有效且客观地反映不同药材的内在质量与特征，以保证临床用药的可靠和量效。

目前，多认为茯苓中的生物活性物质为三萜类和多糖类组分。对于茯苓中的三萜类成分，国内已开展诸多研究。刘校妃等报道了(时珍国医国药，2016(3)，516-518)茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸含量的高效液相色谱波长切换法同时测定。周军等报道了(天津药学，2015，27(6)，12-17)HPL C法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量，但是这些检测项的含量极低，单一成分的含量大多不足万分之一，这可能也是截止2015年版的《中国药典》至今均未将其列为茯苓药材及饮片含量测定项的主要原因。

目前，现有技术中对于茯苓的质量控制项还没有达到药典中可作为药物的质量控制项的含量的标准，因此，急需一种合适的质量控制项对茯苓进行有效的质量控制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中茯苓的质量控制项如三萜类物质的测定的含量均较低，因而缺乏有效的针对茯苓质量控制的检测方法，且对于核苷类含量的测定方法采用外标法，误差较大，而提供了茯苓中核苷含量的检测方法。本发明对茯苓中的核苷的检测方法测得的各核苷的含量较高，可有效的对茯苓标准汤剂和茯苓配方颗粒进行质量控制，并且采用了内标法对茯苓供试品溶液中的各核苷的含量进行高效液相色谱的检测，同时采用外标一点法对茯苓供试品溶液中的各核苷的含量进行计算，测量的误差较小，操作简单、稳定、重现性好、检测效率高，具有较强实用性。

本发明收集不同产地二十二批次的茯苓药材，采用水煎煮法制备茯苓配方颗粒的标准汤剂，拟采用内标法以减小其测定误差，并且通过付出创造性劳动摸索出了本发明中内标法中的内标物以及高效液相色谱的流动相洗脱梯度，可较好实现对茯苓配方颗粒中的核苷类的分析。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了茯苓中核苷含量的检测方法，其包括以下步骤：

以栀子苷为内标，通过高效液相色谱检测茯苓供试品溶液中核苷的含量即可。

本发明中，所述的核苷一般包括尿苷、鸟苷、腺苷、尿嘧啶、鸟嘧啶和腺嘧啶的一种或多种；较佳地为尿苷、鸟苷和腺苷中的一种或多种；例如尿苷、鸟苷和腺苷。

本发明中，所述高效液相色谱检测中，一般采用梯度洗脱的方式进行。

本发明中，所述高效液相色谱检测中，采用的流动相一般为体积百分比为0～0.1％的甲酸水溶液和乙腈；较佳地，所述梯度洗脱的流动相为水和乙腈，或，所述梯度洗脱的流动相为体积百分比为0.05％的甲酸水溶液和乙腈；更佳地，所述梯度洗脱的流动相为水和乙腈。

本发明，当所述流动相为水和乙腈时，梯度洗脱条件较佳地按下述方式中的任意一种进行：

方式I：