[发明专利]重组串联融合蛋白制备目标多肽的方法

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，包括：串联的多个目标蛋白序列，相邻两个所述目标蛋白序列通过连接序列相连，所述连接序列适于通过蛋白酶切割从而形成多个游离目标蛋白，所述多个游离目标蛋白序列不被所述蛋白酶切割，所述游离目标蛋白的C-末端和N-末端均不含有额外残基；

所述连接序列构成所述目标蛋白序列的C-末端，

所述目标蛋白序列的C-末端为KR，

所述融合蛋白进一步包括辅助肽段，所述辅助肽段的羧基端通过所述连接序列与所述串联的多个目标蛋白序列的N-末端相连，

所述辅助肽段包括标签序列以及促表达序列，

所述促表达序列的氨基酸序列为EEAEAEA、EEAEAEAGG或EEAEAEARG，

所述连接序列中含有第一蛋白酶识别位点和第二蛋白酶识别位点，并且所述游离目标蛋白序列中不含有所述第一蛋白酶识别位点和所述第二蛋白酶识别位点，所述第一蛋白酶为Kex2，所述第二蛋白酶为CPB。

2.根据权利要求1中所述的融合蛋白，其特征在于，所述连接序列中第一蛋白酶识别位点适于被第一蛋白酶识别并切割以便形成第一蛋白酶切割产物，

所述连接序列中第二蛋白酶识别位点适于被第二蛋白酶识别并切割，

所述第一蛋白酶切割产物的N-末端不携带所述连接序列的残基，

所述第二蛋白酶适于对所述第一蛋白酶切割产物的C-末端进行切割，以便形成多个游离目标蛋白，所述游离目标蛋白的C-末端和N-末端均不含有所述连接序列的残基；

所述连接序列中第一蛋白酶识别位点和所述第二蛋白酶识别位点满足下列条件：

第一蛋白酶为Kex2，所述第二蛋白酶识别位点为羧基端R或K，所述第二蛋白酶为CPB。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述标签序列的氨基酸序列为重复His序列；所述辅助肽段的首位氨基酸为甲硫氨酸。

4.根据权利要求1或2所述融合蛋白，其特征在于，所述目标蛋白序列的长度为10~100个氨基酸。

5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述游离目标蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1~6所示。

6.一种获得游离目标蛋白的方法，其特征在于，包括：

提供权利要求1~5任一项所述的融合蛋白；

使所述融合蛋白与蛋白酶接触，所述蛋白酶是基于所述连接序列确定的，所述多个游离目标蛋白序列不被所述蛋白酶切割，以便获得多个游离目标蛋白，所述游离目标蛋白的C-末端和N-末端均不含有额外残基。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白与所述第一蛋白酶的质量比为250:1~2000:1。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白与所述第一蛋白酶的质量比为2000:1。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白是通过对微生物进行发酵处理后获得的，所述微生物携带有编码所述融合蛋白的核酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述微生物为大肠杆菌。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，进一步包括对微生物发酵处理产物进行破碎和溶解处理，所述溶解处理是在去垢剂存在的条件下进行的，以便获得所述融合蛋白。

12.一种核酸，其特征在于，编码权利要求1~5任一项所述的融合蛋白。

13.一种构建体，其特征在于，携带权利要求12所述的核酸。

14.一种重组细胞，其特征在于，包含权利要求12所述的核酸或权利要求13所述的构建体或表达权利要求1~5任一项所述的融合蛋白。