[发明专利]一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物LAMP检测试剂盒与检测方法在审
| 申请号： | 201910564909.2 | 申请日： | 2019-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN110373498A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 贺振;董婷婷;吴伟文;陈雯;李良俊 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 薛海霞;董建林 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘薯潜隐病毒 分离物 检测 特异性引物 反转录酶 分子水平 田间条件 荧光定量 试剂盒 灵敏 替代 | ||
1.一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物LAMP检测试剂盒，其特征在于包括针对SPLV-lotusCP基因设计的LAMP特异性引物组合物SPLV-lotusL，该LAMP特异性引物组合物由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP组成；各引物序列具体如下：
F3：5’-CCAATGGTACGAAGGAGTG-3’；
B3：5’-GCCGCAAAATCTATCAGTG-3’；
FIP：5’-CGATGCACCATACCACTAGCCAAGAATGCTTATGAAGTAGACG-3’；
BIP：5’-TCCCCGAACATAAATGGCGATTCAAAATCTATCAGTGGTTTGATTG-3’。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Prime Script™Reverse Transcriptase反转录酶、Oligo (dT)15 Primer、Ribonuclease Inhibitor抑制酶、dNTP、DNA Marker、pMD18-T载体、RNA提取试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、WarmStart®Colorimetric LAMP 2X Master Mix、WarmStart® LAMP Kit (DNA & RNA)。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
4.一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus的LAMP检测方法，其包括以下步骤：
（1）采用多糖多酚植物组织的裂解法提取待测样品总RNA；
（2）构建阳性质粒标准品；
（3）设计并筛选引物；引物包括：
F3：5’-CCAATGGTACGAAGGAGTG-3’；
B3：5’-GCCGCAAAATCTATCAGTG-3’；
FIP：5’-CGATGCACCATACCACTAGCCAAGAATGCTTATGAAGTAGACG-3’；
BIP：5’-TCCCCGAACATAAATGGCGATTCAAAATCTATCAGTGGTTTGATTG-3’；
（4）采用LAMP反应体系进行环介导等温扩增。
5.根据权利要求4所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus环介导等温扩增的检测方法，其特征在于，步骤（4）的LAMP反应体系中，反应时间为60 min。
6.根据权利要求4所述的一种甘薯潜隐病毒莲藕分离物SPLV-lotus环介导等温扩增的检测方法，其特征在于，步骤（4）的LAMP反应体系中，反应温度为62℃。
7.权利要求1-3任意一项所述的甘薯潜隐病毒莲藕分离物LAMP检测试剂盒在莲藕脱毒苗检测中的应用。
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