[发明专利]一株吉他霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株SML及其应用在审
| 申请号： | 201910565378.9 | 申请日： | 2019-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN110257342A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;郭玲玲;匡华;徐丽广;马伟;刘丽强;吴晓玲;宋珊珊;胡拥明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/44;C07K14/765;C07H17/08;C07H1/00;C12R1/91 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 吉他霉素 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 保藏 弗氏佐剂 完全抗原 间接竞争酶联免疫法 免疫BALB/c小鼠 小鼠骨髓瘤细胞 中国微生物菌种 筛选 应用 免疫检测领域 检测灵敏度 微生物中心 次亚克隆 加强免疫 食品安全 残留量 高效价 脾细胞 细胞株 等量 小鼠 分泌 乳化 水产品 细胞 融合 检测 管理 | ||
1.一株吉他霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株SML，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年3月7日，保藏编号CGMCC No.17392。
2.吉他霉素单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.17392的吉他霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株SML分泌产生。
3.权利要求2所述吉他霉素单克隆抗体的应用，其特征在于：用于食品安全检测中吉他霉素残留的分析检测。
4.吉他霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株SML免疫用完全抗原的制备方法，其特征是步骤如下：
（1）半抗原的制备：采用CMO法制备半抗原KIT-CMO；
具体方法如下：称取200mg KIT于圆底烧瓶中，加入30mg、0.24mmol的CMO，加入5mL甲醇和5mL、0.02 M NaHCO3缓冲溶液，置于60℃恒温磁力搅拌水浴锅中进行反应12h，反应结束后，反应液用氮吹仪吹干，粘附于瓶底的衍生物用无水甲醇再次复溶，离心除去不溶白色颗粒物质，并取甲醇相再次吹干以获得白色吉他霉素肟化衍生物KIT-CMO，置于4℃冰箱保存备用；
（2）完全抗原的制备：采用活化酯EDC法合成免疫原KIT-EDC -BSA, 采用羰基二咪唑CDI法合成包被原KIT-CDI-OVA。
5.根据权利要求4所述完全抗原的制备方法，其特征是：步骤（2）中KIT-EDC-BSA合成的具体步骤如下：称取2.61mg半抗原KIT-CMO，7.64mg EDC，4.6mg NHS 于棕色反应瓶中，加入200µL DMF溶解，室温下搅拌12h，称A液：取10.0mg BSA加入到2mL pH=9.6的0.01M的碳酸盐缓冲溶液中，称B液；将A液逐滴加入到B液中，室温下搅拌反应过夜，随后将反应液装入煮过的透析袋中，用0.01M PBS透析三天，每隔12h更换一次透析液，即得到免疫原KIT-EDC-BSA，将免疫原分装保存于-20℃。
6.根据权利要求4所述完全抗原的制备方法，其特征是：步骤（2）中KIT-CDI-OVA合成的具体步骤如下：称取KIT-CMO与CDI用无水DMF溶解，其中KIT-CMO与CDI的摩尔比为1：10，37℃活化2h，称C液；称取10.0 mg OVA，用2mL pH = 9.6、0.01M的碳酸盐缓冲溶液溶解，称D液；将C液逐滴加入到D液中，磁力搅拌8~10h；反应结束后，用0.01M PBS充分透析后，鉴定偶联成功后，分装后置于-20℃冰箱保存待用。
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