[发明专利]一株病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC及其应用

说明书

本发明涉及一株病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明细胞株NTC，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号CGMCC No.17390。将病毒灵的完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化，通过免疫BALB/c小鼠。首次免疫用完全弗氏佐剂，多次加强免疫用不完全弗氏佐剂，最后用病毒灵完全抗原冲刺免疫。将高效价，低IC₅₀小鼠的脾细胞，通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合；再经过间接竞争酶联免疫筛选及亚克隆，得到细胞株NTC。其分泌的单克隆抗体，对病毒灵具有较好的特异性和检测灵敏度，可实现对鸡肉、鸡的肝脏和饲料中病毒灵残留量的检测，为食品中病毒灵残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

病毒灵（Virus spirit，ABOB）是一种抗病毒药，抑制病毒，对多种病毒（包括甲型H1N1流感、流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、腺病毒等）有抑制作用。用于流感、流行性腮腺炎、水痘、疱疹、滤泡性结膜炎等的防治。病毒没有自己的代谢系统，只能寄生于其他细胞内，利用宿主细胞的酶进行代谢，复制。但是病毒的聚合酶并不跟人体完全一样，比如有些RNA病毒可进行反转录，其中含有的RNA指导的RNA聚合酶就是病毒所有的，但是的确，抑制或杀伤病毒的药物常影响人体细胞的复制，或通过其他机制损伤人体细胞而产生毒性。

病毒灵的主要副作用是，出汗、食欲不振等反应。国家标准的病毒灵并没有停用，1999年12月11日国家药监局对地方标准的病毒灵公布停用，理由是效果不确切。2002年以后国家药监局以“国药准字”批准了全国共382家药品生产企业按照国家标准生产病毒灵。这些病毒灵至今没有停用。

采用高效液相色谱检测鸡肉中病毒灵残留量，最低检测限为48ng/g。采用高效液相色谱方法检测，检测方法较为繁琐、复杂，检测限过高，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对ABOB的高效、快速的检测方法，而酶联免疫法（ELISA）前处理简单，成本低，可实现大量样品的快速检测，且检测时对样本的纯度要求不高。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对病毒灵的高特异性单克隆单体。

发明内容

本发明的目的是提供一株病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC，由该细胞株制备的抗体对病毒灵具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立病毒灵的免疫学检测方法。

本发明的技术方案，一株病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年3月7日，保藏编号CGMCCNo.17390。

病毒灵单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.17390的病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC分泌产生。

所述病毒灵单克隆抗体的应用，用于食品安全检测中病毒灵残留的分析检测。

本发明提供的病毒灵单克隆抗体杂交瘤细胞株NTC的制备基本步骤为：

（1）半抗原的衍生：

原药 Mol. Wt: 171.2

半抗原：用病毒灵原药衍生出带苯环的羧基，增强其免疫原性。