[发明专利]多亚基蛋白质例如抗体在转化的微生物例如巴斯德毕赤酵母中的高纯度产生

权利要求书

1.一种产生全长抗体的方法，其包括：

(a)提供包含含有提供所述全长抗体的表达的基因的巴斯德毕赤酵母细胞的生长培养物，和使所述毕赤酵母在所述生长培养物中生长约12-16小时的生长期；

(b)在所述生长期后将乙醇添加至所述培养物，其中乙醇至巴斯德毕赤酵母培养物的添加是单次大剂量添加，所述大剂量导致所述培养物中的乙醇浓度在0.5％与1.5％w/v之间；和

(c)培养所述培养物以产生分泌的所述全长抗体，其中所述培养包括将含有可发酵碳源的进料添加至所述培养物，

其中所述方法相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有异常化学计量的抗体复合物的相对丰度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述大剂量乙醇相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法增加稳定的二硫键的形成。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含一个或多个包含至少一个二硫键的多肽。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低一种或多种产物相关变体的相对丰度。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低产物相关变体的相对丰度，所述变体具有比所述期望的抗体更高或更低的表观分子量，如通过尺寸排阻色谱法或凝胶电泳所检测的。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有异常二硫键的抗体复合物的相对丰度。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有降低的半胱氨酸的抗体复合物的相对丰度。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其相对于在所述大剂量乙醇不存在的情况下进行的所述相同方法降低具有异常糖基化的抗体复合物的相对丰度。

9.根据权利要求3所述的方法，其调节重链间二硫键的形成或稳定性。

10.根据权利要求3或9所述的方法，其调节连接轻链与重链的二硫键的形成或稳定性。