[发明专利]一种检测小麦叶锈菌的试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及病原菌检测技术领域，尤其涉及一种检测小麦叶锈菌的试剂盒及鉴别方法。该试剂盒中包括5条等温扩增引物，其序列如SEQ ID NO.1～5所示。该5条引物以人为选定的小麦叶锈菌特异性序列(如SEQ ID NO.6)为基础而设计得到，含有小麦叶锈菌DNA片段的待测物能够利用上述引物进行大量扩增，所得的扩增产物可以与荧光染料发生颜色变化，而不含小麦叶锈菌DNA片段的待测物则不会产生任何扩增，不与荧光染料发生颜色变化，从而能够快速鉴别待测物中是否含有小麦叶锈菌DNA，且其他病原菌对该结果无干扰，检测灵敏度高、特异性好、检测率高。

技术领域

本发明涉及病原菌检测技术领域，尤其涉及一种检测小麦叶锈菌的试剂盒及检测方法。

背景技术

小麦叶锈菌是一种严重危害小麦生产的真菌性气传病害，发生范围广、破坏性强、循环式侵染、专性寄生、流行成灾率高，可导致小麦减产甚至绝收。小麦锈菌在成功侵染寄主小麦后，一般具有9～14天甚至更长时间的潜育扩展阶段，在此期间，寄主小麦的发病症状不明显，难以被观测到，当叶锈病症状一旦显现时，大量病原菌孢子已在小麦叶片上大量繁殖产生，并可随气流进行大范围的传播扩散，导致病害的流行爆发。并且，在苗期小麦上条锈病等农作物病症和叶锈病的典型症状差异不明显，易被混淆，难以针对小麦叶锈菌开展及时有效的防治工作。因此，在侵染初期准确检测小麦叶锈菌对于控制病害发生、规避病害流行风险具有重要意义。

在农作物病害诊断和病原菌鉴定方面，DNA/RNA探针技术和聚合酶链式反应(PCR)由于具有强专化性、高灵敏度以及程序化试验操作等优势，已被越来越广泛地推广应用。常规PCR技术检测的操作过程包括样品DNA提取、PCR扩增，以及对扩增产物进行电泳分离、荧光检测，虽然准确性和可靠性均较高，但操作步骤繁琐，耗费时间长、检验仪器昂贵。环介导等温扩增技术(LAMP)通过针对靶基因上的六个区域设计四条引物，利用链置换型DNA聚合酶在恒温条件下进行扩增反应，在15-60分钟内即可实现10⁹-10¹⁰倍的扩增，产生的大量扩增产物可通过肉眼观察，灵敏度高，操作简单，对仪器要求低。但环引物间的非特异性配对可导致假阳性结果，使检测结果判断失误。

发明内容

针对现有常规PCR技术检测小麦叶锈菌步骤繁琐、耗费时间长、LAMP技术存在假阳性结果的问题，本发明提供了一种检测小麦叶锈菌的试剂盒。

以及，本发明还提供了检测小麦叶锈菌的方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种检测小麦叶锈菌的试剂盒，包括5条等温扩增引物，所述等温扩增引物的序列(如SEQ ID NO.1～5所示)为：

F3：5′-TCTGTAGATCCGCCTCAG-3′；

B3：5′-GCAATTTTAACCCTAGTTACAACTT-3′；

FIP：5′-CGCCAAACCACATGTACATATGTAA-CAAGGGGGATCCTGACTAC-3′；

BIP：5′-GTAGCGCTGACACGTCACAA-TCCTTGTAACTATACTCCTTCC-3′；

LB：5′-GCCATAACTCAGTAACTCAG-3′。