[发明专利]一种5－羟基吲哚乙酸测定试剂

权利要求书

1.一种5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，含有5-羟基吲哚乙酸特异性抗体和指示试剂；

所述5-羟基吲哚乙酸特异性抗体为5-羟基吲哚乙酸免疫原免疫实验动物后产生的完整抗体分子；

所述的指示试剂选自酶试剂、放射性同位素试剂、荧光试剂或发光试剂中的任意两种按质量比为1:1混合而成；其中，所述的酶试剂由5-羟基吲哚乙酸酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶 - 半抗原酶标偶联物，酶的底物为葡萄糖 -6-磷酸。

2.如权利要求1所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，所述完整的抗体分子为采用单一的 5-羟基吲哚乙酸免疫原对动物加强免疫所获得的多克隆抗体。

3.如权利要求1所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，所述5-羟基吲哚乙酸免疫原的制备方法，包括如下步骤：

步骤1，将载体蛋白溶解于磷酸缓冲液中；

步骤2，将5-羟基吲哚乙酸、二甲基甲酰胺、乙醇、磷酸钾缓冲液1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺，按着一定配比加入到小烧杯中搅拌溶解，在室温下搅拌溶解反应，得溶液A；

步骤3，将溶解好的溶液A滴加至载体蛋白溶液中，搅拌过夜，得到抗原；将合成好的抗原经过透析进行纯化，得到 5-羟基吲哚乙酸免疫原。

4.如权利要求3所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，步骤1中，所述蛋白的质量为100 ～ 300g。

5.如权利要求3所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，步骤1中，所述磷酸缓冲液为25 ～ 75ml 0.2M，pH 8.5。

6.如权利要求3所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，步骤2中，所述一定配比如下：50-100mg 5-羟基吲哚乙酸、0.5-1.5ml 二甲基甲酰胺、0.5-1.5ml 乙醇、2.5-7.5ml 10mM，pH5.0 的磷酸钾缓冲液50-100mg 1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亚胺、15-20mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺。

7.如权利要求3所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，步骤2中，所述搅拌溶解反应 30 ～ 60min。

8.如权利要求3所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，步骤3中，所述搅拌温度为2～8℃。

9.如权利要求1所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，所述5- 羟基吲哚乙酸特异性抗体的制备方法如下：

步骤一，用 PBS 将 5-羟基吲哚乙酸免疫原稀释，得到抗原溶液，然后用 0.1ml 抗原溶液与等量弗氏完全佐剂混合，对实验动物进行注射；

步骤二，1周后，再用0.1ml相同的抗原溶液与等量弗氏不完全佐剂对上述实验动物注射一次，之后每隔2周注射一次；

步骤三，对步骤二的实验动物取血，分离纯化得到效价为 1:20000的抗 5- 羟基吲哚乙酸特异性抗体。

10.如权利要求9所述的5－羟基吲哚乙酸测定试剂，其特征在于，所述5- 羟基吲哚乙酸免疫原稀释至 0.1 ～ 3.0mg/ml。