[发明专利]一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法

权利要求书

1.一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，步骤如下：

（1）甲醛固定后组织的脱水处理：取南美白对虾卵巢组织，固定于10%甲醛溶液中备用，再用手术刀片切取长度为0.5-1.0cm的卵巢组织，浸泡在20%蔗糖溶液与OCT冷冻包埋剂体积为1:1的液体，浸泡时间至少16个小时；

（2）组织包埋：将步骤（1）中浸泡好的卵巢组织取出，放入盛放OCT冷冻包埋剂的圆柱形软管模型中，用镊子夹取模型在液氮中速冻15-20s，然后放进冷却好的冷冻切片机中，去除模型后得到样品，将样品用OCT冷冻包埋剂固定在预冷过的样品托上，放在速冻架上等待包埋剂完全冷冻；

（3）冷冻切片：调节冷冻切片机冷冻箱温度为-18℃，样品头温度为-15℃，将样品托插入样品头，调整好样品与刀片的位置，先用修块模式进行修块使包埋的卵巢组织露出，后调至切片模式，将切片厚度调为5μm，进行切片；

（4）切片固定：将步骤(3)切好的薄片用镊子或样品针捻于载玻片上，用甲醇固定，将载玻片在甲醇中浸泡5-10s，晾干后放进染色架中;

（5）染色：将步骤(4)中得到的组织切片先用苏木素染液染色1.5min，然后用水冲洗5min；再在分化液分化30s；接着在水中浸泡15min或50℃温水浸泡5min；然后置于伊红染液1min，染色后用水冲洗；水中浸泡5min，脱水后使之透明，进行封片。

2.根据权利要求1所述的一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，脱水与封片的具体步骤如下：将载玻片先后分别置于95%乙醇Ⅰ溶液、95%乙醇Ⅱ溶液、100%乙醇Ⅰ溶液、100%乙醇Ⅱ溶液、二甲苯Ⅰ溶液、二甲苯Ⅱ溶液中浸泡1min；最后用中性树胶封固。

3.根据权利要求1所述的一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述冷冻切片机型号为Leica CM1950。