[发明专利]一种检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法

权利要求书

1.一种检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取待测水稻种子，利用水培法获得水稻幼苗；

(2)将水稻幼苗置于无光环境中进行黑暗处理12-36h；

(3)将经过黑暗处理的水稻幼苗置于不同的光照条件下进行培养；

(4)剪取经光照处理后的水稻幼苗的旗叶中部区域，置于固定液中，于真空度为-0.1MPa的条件下处理5-10min，再于4℃条件下放置5-7天，固定叶片；

(5)将固定的叶片从固定液中取出，吸干液体，剪去叶片的长臂端，近轴面朝上，置于50％甘油中，封片，再利用激光共聚焦显微镜，在568nm的激发光下观察并记录水稻叶绿体在细胞中的分布情况。

2.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述水培法包括：将水稻种子浸泡于水中催芽，待出芽后播种，先水培2-4天，再更换成水稻培养液培养2周，培养条件为30℃，每天12-14小时光照培养，10-12小时暗培养。

3.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(2)中，将水稻幼苗放入置于暗室的无光培养箱中进行黑暗处理24h。

4.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(3)中，光照培养的时间为2小时。

5.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(4)中，于水稻幼苗旗叶中部区域剪取2-3mm小段，置于固定液中，每个样品剪3-4段。

6.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述固定液中含有20mM PIPES、5mM MgCl₂、5mM EGTA、0.5mM苯甲基磺酰氟、1％二甲基亚砜，pH值为7.0。

7.如权利要求1所述的检测水稻叶片中叶绿体经光处理后分布情况的方法，其特征在于，步骤(5)中，选取水稻叶片短臂端最边缘的叶肉细胞进行观察。