[发明专利]间充质干细胞诱导分化及包被培养皿制备

说明书

本发明公开了间充质干细胞诱导分化及包被培养皿制备。琼脂糖凝胶电泳结果显示，未包被培养皿培养组Aggrecan和Ⅱ型胶原无明显表达，包被培养皿组Aggrecan和Ⅱ型胶原表达明显，说明包被培养皿组出现了明显的软骨标志物的表达，木聚糖包被培养皿可以用于人脐带间充质干细胞体外培养诱导其成软骨分化。阿尔辛蓝染色结果显示，对照组阿利辛蓝染色阴性，木聚糖组和阳性组阿利辛蓝染色阳性，说明木聚糖组和阳性组均出现了明显的软骨基质蛋白聚糖的沉积，表明木聚糖组和阳性组培养基可以有效诱导人脐带间充质干细胞体外成软骨分化。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及木聚糖诱导间充质干细胞分化及制备包被培养皿的生物用途。

背景技术

间充质干细胞(MSCs)可以分化成骨、软骨、脂肪、肌肉、内皮等多种组织细胞，甚至可以跨胚层分化成视网膜、神经细胞、造血细胞，是细胞治疗的重要种子细胞。

骨关节炎是一种风湿性疾病，是世界上最常见的关节疾病之一，60岁以上群体中男性发病率达10％，而女性发病率高达18％。骨关节炎是以关节软骨退行性病变、软骨下骨硬化、滑膜炎为特征，并伴有骨头摩擦、僵硬、疼痛及活动受限等症状的一种代谢性疾病。目前对软骨修复的治疗主要集中在关节镜灌洗、清创术、微骨折诱导和自体软骨细胞植入。虽然上述技术能够维护正常关节功能和抑制其进一步退化，但不能恢复损伤的软骨，不具有与原生软骨相同的生化和生物力学特性，需要进一步发展再生医学并永久性恢复关节软骨。

以间充质干细胞为种子细胞制备软骨细胞，为恢复损伤的软骨提供了可能。暨南大学医学院罗二梅等人发现，还原型谷胱甘肽对人脐带间充质干细胞的成软骨诱导具有显著的促进作用(还原型谷胱甘肽对人脐带间充质干细胞成软骨诱导的影响，中国生物工程杂志，2013)。解继胜等人发现，含有胰岛素样生长因子1的条件培养液可以诱导人脐带血间充质干细胞分化为软骨细胞(人脐带血间充质干细胞分离培养及向软骨细胞的分化，中国组织工程研究与临床康复，2008)。青岛大学医学院附属医院冯学涛等人发现，血小板裂解液可以显著促进人脐带间充质干细胞在体外定向分化为软骨细胞(血小板裂解液对人脐带间充质干细胞体外成软骨分化的影响，中国修复重建外科杂志，2011)。

发明内容

本发明旨在提供木聚糖诱导间充质干细胞软骨分化及制备包被培养皿的生物用途。

本发明目的通过以下方案实现：

一种包被培养皿，该培养皿内壁包被有木聚糖。

一种制备上述包被培养皿的方法，包括如下步骤：

木聚糖溶液的制备：取适量木聚糖溶解于pH值为8.0的三乙胺水溶液中，磁力搅拌器搅拌12h，用冰醋酸调节pH值至中性，配制成10g/L的木聚糖溶液，4℃保存，8h内使用。

包被培养皿的制备：取直径100mm的无菌培养皿，加入5mL上述木聚糖溶液，50℃烘干成膜，去离子水漂洗若干次，晾干保存。

包被培养皿使用前用紫外线照射消毒，并用培养基润洗。

一种上述包被培养皿用于诱导间充质干细胞成软骨分化的用途，其中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。

一种木聚糖用于体外诱导间充质干细胞成软骨分化的用途，其中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。

有益效果：

1、琼脂糖凝胶电泳结果如图3所示，未包被培养皿培养组Aggrecan和Ⅱ型胶原无明显表达，包被培养皿组Aggrecan和Ⅱ型胶原表达明显，说明包被培养皿组出现了明显的软骨标志物的表达，木聚糖包被培养皿可以用于人脐带间充质干细胞体外培养诱导其成软骨分化。