[发明专利]用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的引物对和探针及试剂盒

权利要求书

1.用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的引物对和探针，其特征在于，包括用于检测NDRG4基因和/或SDC2基因甲基化的引物对和探针；其中

用于检测NDRG4基因甲基化的引物对为SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示序列，探针为SEQ ID No：3所示序列；

用于检测SDC2基因甲基化的引物对为SEQ ID No：4和SEQ ID No：5所示序列，探针为SEQ ID No：6所示序列和SEQ ID No：7所示序列。

2.根据权利要求1所述的用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的引物对和探针，其特征在于，还包括内参ACTB的引物对和探针，其中内参ACTB的引物对为SEQ ID No：8和SEQ ID No：9所示序列，探针为SEQ ID No：10所示序列。

3.根据权利要求2所述的用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的引物对和探针，其特征在于，各所述探针的5'端标记有荧光报告染料，3'端标记有淬灭荧光染料，所述荧光报告染料选自FAM、VIC、HEX、JOE、Cy3、ROX和Cy5中的一种，所述淬灭荧光染料选自BHQ1、BHQ2、BHQ3和TAMRA中的一种。

4.一种用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，包括粪便DNA提取试剂、亚硫酸盐转化试剂、实时荧光PCR扩增反应试剂。

5.根据权利要求4所述的一种用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述粪便DNA提取试剂包括粪便DNA保护液、裂解液、蛋白酶K溶液、洗涤液和洗脱液。

6.根据权利要求4所述的一种用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述亚硫酸盐转化试剂包括亚硫酸盐溶液、结合液、脱硫溶液、洗涤液和洗脱液。

7.根据权利要求4所述的一种用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的试剂盒，其特征在于，所述实时荧光定量PCR扩增反应试剂包括如权利要求1～3中任一项所述的引物对和探针，每一引物对的各引物的终浓度均为100～300nM，各探针的终浓度均为100～150nM。

8.根据权利要求4所述的用于粪便样本进行早期结直肠癌基因甲基化检测的引物对和探针，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增反应试剂还包括PCR扩增缓冲液、DNA聚合酶、阳性对照品、阴性对照品、dNTPs、镁离子，DNA聚合酶为1～2U，镁离子浓度为2～4mM，dNTPs为50～100uM，阳性对照品采用大肠癌细胞系基因组与健康人基因组DNA按照1:99至1:4的比例混合；阳性对照品采用健康人基因组DNA。