[发明专利]一种基于金银纳米组装体的藻毒素比率拉曼传感器的构建方法

权利要求书

1.一种基于金银纳米组装体的藻毒素比率拉曼传感器的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

(1)Au@gap@AgAu核壳纳米粒子的合成：

①采用柠檬酸钠还原法合成粒径大小为15nm的金纳米粒子，在已合成的金纳米粒子表面修饰拉曼信标分子对氨基苯硫酚，然后进行一层银壳的生长形成Au@Ag核壳纳米粒子；

②通过在Au@Ag核壳纳米粒子表面还原氯金酸，使表面银壳被刻蚀从而在纳米粒子内部形成间隙，制备Au@gap@AgAu核壳纳米粒子；

(2)Au@gap@AgAu核壳纳米粒子-氧化石墨烯/四氧化三铁纳米组装体的制备：

在Au@gap@AgAu核壳纳米粒子表面修饰藻毒素适配体，通过适配体与氧化石墨烯/四氧化三铁纳米复合物上氧化石墨烯之间的π-π堆积相互作用，将Au@gap@AgAu核壳纳米粒子连接到氧化石墨烯/四氧化三铁纳米复合物上，该结构表现出对氨基苯硫酚的较强拉曼增强信号以及石墨烯自身的拉曼信号；

(3)比率拉曼传感器的构建：

在已构建好的拉曼传感体系中，加入不同浓度的藻毒素溶液，部分Au@gap@AgAu核壳纳米粒子表面的核酸适配体与藻毒素分子特异性识别，使得部分Au@gap@AgAu核壳纳米粒子从氧化石墨烯/四氧化三铁纳米复合物上脱落，通过磁铁使得组装体与被解离下来的Au@gap@AgAu核壳纳米粒子分离，通过拉曼光谱仪测定解离后的纳米组装体的拉曼信号，以对氨基苯硫酚的拉曼信号为检测信号，石墨烯的拉曼信号为内部标准信号，建立组装体比率拉曼信号强度和藻毒素浓度间的标准曲线。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述Au纳米粒子的表面修饰的具体制备步骤如下：采用柠檬酸钠还原法合成粒径大小为15nm的金纳米粒子，取1mL的金纳米粒子以7000转每分钟的速度离心10min，去除上清液，将沉淀重悬在200μL超纯水中；取100μL的金纳米粒子，加入2μL 100μM对氨基苯硫酚，使其终浓度为2μM，在室温反应12h，以7000转每分钟的速度离心10min，去除未修饰的对氨基苯硫酚，将沉淀重悬在100μL超纯水中。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述Au@Ag核壳纳米粒子的具体制备步骤如下：将1mL0.1M磷酸盐缓冲液和200μL 1％聚乙烯吡咯烷酮以及100μL抗坏血酸混合均匀，加入50μL制备好的对氨基苯硫酚编码金纳米粒子，震荡均匀，加入500μL1mM硝酸银溶液，摇晃3h，以7000转每分钟的速度离心10min，去除上清液，将沉淀重悬在400μL超纯水中。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述的Au@gap@AgAu核壳纳米粒子的具体制备步骤如下：将2mL 1mM聚乙烯吡咯烷酮和0.5mL 10mM抗坏血酸以及300μL100mM盐酸溶液混合均匀，加入200μL制备好的Au@Ag核壳纳米粒子，使用注射泵以200μL/min的速度将400μL 0.1mM氯金酸溶液加入到混合物中，反应10min后，将混合物以7000转每分钟的速度离心10min，将沉淀物溶解在200μL超纯水中，该反应在室温下进行，且通过简单控制盐酸溶液的添加量调节体系pH可以得到具有不同间隙大小的Au@gap@AgAu核壳纳米结构。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述Au@gap@AgAu核壳纳米粒子-氧化石墨烯/四氧化三铁纳米组装体的制备具体步骤如下：取50μLAu@gap@AgAu核壳纳米粒子溶液和50μL 1μM藻毒素适配体，混于200μL Tris-硼酸缓冲液中；12h后，溶液以7000转每分钟转速下离心10min，将沉淀物溶解在50μL超纯水中；基于藻毒素适配体与氧化石墨烯/四氧化三铁纳米复合物上氧化石墨烯之间的π-π堆积相互作用，制备Au@gap@AgAu核壳纳米粒子-氧化石墨烯/四氧化三铁纳米组装体。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述藻毒素比率拉曼传感器的构建，具体步骤如下：将制备好的Au@gap@AgAu核壳纳米粒子-氧化石墨烯/四氧化三铁纳米组装体作为拉曼基底用于藻毒素的检测；取50μL上述制备的组装体加入到100μL 20mMTris-硼酸缓冲液中，加入100μL不同浓度的藻毒素溶液(0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、20和50nM)混合，在室温下孵育30min，部分Au@gap@AgAu核壳纳米粒子表面的适配体与藻毒素分子特异性识别，使得部分Au@gap@AgAu核壳纳米粒子从氧化石墨烯/四氧化三铁纳米复合物上脱落，通过磁铁使得组装体与被解离下来的Au@gap@AgAu核壳纳米粒子分离，将组装体的沉淀物用70％乙醇溶液洗涤三次；通过拉曼光谱仪测定解离后的纳米组装体的拉曼信号，以对氨基苯硫酚的拉曼信号为检测信号，石墨烯的拉曼信号为内部标准信号，建立组装体比率拉曼信号强度和藻毒素浓度间的标准曲线。