[发明专利]一种植物乳杆菌菌剂及其高密度发酵制备方法以及应用

权利要求书

1.一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：步骤如下：将植物乳杆菌经种子培养后，按照接种量3-5％接入发酵培养基，震荡培养，发酵过程中进行蔗糖补料，所述补料的蔗糖浓度为800-1000g/L，所述蔗糖补料方式为：当发酵培养至7-8h，蔗糖残留量为0.04-0.06％时，以5-6mL/L·h的速率开始补料；当发酵培养至11-15h后，蔗糖残留量为0.04-0.10％时，以10-18mL/L·h速率补料，继续发酵至17-19h后，蔗糖残留量为0.10-0.15％时，以10-15mL/min速率补料，继续发酵1-2.5h结束，将所得发酵液经离心获得菌体，向所述菌体中加入冻干保护剂混合，并经冷冻干燥获得植物乳杆菌菌剂。

2.如权利要求1所述一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：所述蔗糖补料方式为：发酵培养7-8h，蔗糖残留量为0.04-0.06％时，以5-6mL/L·h的速率开始补料，发酵培养至11-12h后，蔗糖残留量为0.04-0.1％时，以10-15mL/L·h速率补料，发酵至14-15h后，蔗糖残留量为0.05-0.10％时，以15-18mL/L·h速率继续流加培养，继续发酵至18-19h后，蔗糖残留量为0.10-0.15％时，以10-15mL/min速率补料，继续发酵1.5-2.5h结束。

3.如权利要求1所述一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：所述冻干保护剂组成为：脱脂奶粉750-800g/L、乳糖450-500g/L、丙三醇20-50g/L、谷氨酸钠1-20g/L、VC 5-10g/L，余量为浓度为0.1M，pH为6.2的PBS溶液。

4.如权利要求1所述一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：所述发酵培养基组成为：蛋白胨8-10g/L，蔗糖15-20g/L，酵母粉15-20g/L，MgSO₄﹒7H20 0.2-0.5g/L，MnSO₄ 0.1-0.2g/L，K2HPO₄ 1-3g/L，0.5-1g/L的甘蔗糖蜜，乙酸钠3-5g/L，吐温80 1.0-2.0mL/L，消泡剂0.3-0.5mL/L，余量为水。

5.权利要求1所述一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：所述发酵培养过程中，发酵培养温度为35-37℃，搅拌转速90-100r/min，维持发酵pH6.1-6.3。

6.如权利要求3所述一种植物乳杆菌菌剂的高密度发酵制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)种子培养：将植物乳杆菌接入种子液体培养基中35-37℃培养箱中静置活化培养21-24h，得到一级种子液；将所述一级种子液以接种量3-5％接种于种子液体培养基中，35-37℃静置培养21-24h，得到二级种子液；将所述二级种子液以接种量3-5％接入种子液体培养基中，35-37℃静置培养21-24h，得到三级种子液；

(2)发酵培养：将所述三级种子液以接种量3-5％接入发酵培养基中，发酵培养温度为35-37℃，搅拌转速90-100r/min，利用50％的氨水调节恒定pH 6.1-6.3，并且通入氮气维持发酵罐压力为0.04-0.06MPa；发酵过程中采取蔗糖补料，所述补料的蔗糖浓度为800-1000g/L，所述蔗糖补料方式为：当发酵培养7-8h，蔗糖残留量为0.04-0.06％时，以5-6mL/L·h的速率开始补料；当发酵培养至11-15h后，蔗糖残留量为0.04-0.10％时，以10-18mL/L·h速率补料，继续发酵至17-19h后，蔗糖残留量为0.10-0.15％时，以10-15mL/min速率补料，继续发酵1-2.5h结束；

(3)菌剂制备：将得到的植物乳杆菌的发酵液经5000-10000g离心，得到菌泥；将冻干保护剂与菌泥按照质量比2-4：1的比例混合搅拌，经预冷处理后，于温度-55℃—-60℃，真空度1-7Pa，处理10-12h，经干燥18-30h后得到植物乳杆菌冻干菌粉。