[发明专利]一种具有阻抗蛋白聚集功能的Aβ42修饰蛋白及其表达与纯化方法

权利要求书

1.一种Aβ42修饰蛋白，其特征在于：所述Aβ42修饰蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述Aβ42修饰蛋白的编码基因，其特征在于：所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.权利要求1所述Aβ42修饰蛋白在阻抗Aβ42蛋白自身的聚集中的用途。

4.包含权利要求1所述Aβ42修饰蛋白编码基因的表达载体或宿主细胞。

5.如权利要求4所述的表达载体或宿主细胞，其特征在于，所述表达载体为pET22b，所述宿主细胞为大肠杆菌。

6.权利要求1所述Aβ42修饰蛋白的制备方法，其特征在于：步骤如下：

(1)在所述Aβ42的基因序列的上游添加6个His，得到His₆-Aβ42基因；

(2)将所述His₆-Aβ42基因插入到经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切的表达载体pET22b上，构建重组表达载体质粒pET22b-His₆-Aβ42；

(3)将所述步骤(2)中构建的重组表达载体质粒转入宿主菌大肠杆菌E coli.BL21(DE3)，得到重组菌株；

(4)对所述重组菌株进行诱导，表达His₆-Aβ42蛋白，并收集菌体经破碎后，利用变性溶液使包涵体变性；

(5)变性后过Ni-NTA树脂，利用纯化洗脱液进行亲和层析纯化得His₆-Aβ42蛋白；

(6)透析去除所述步骤(5)得到的His₆-Aβ42蛋白中的杂质，促进His₆-Aβ42蛋白聚集形成淀粉样纤维；

(7)透析完成后经离心得到沉淀，利用六氟异丙醇溶液溶解所述沉淀，经溶解、离心，取上清经冻干，即得His₆-Aβ42蛋白。

7.如权利要求6所述Aβ42修饰蛋白的制备方法，其特征在于：所述变性溶液组成为：20mM Tris，150mM NaCl，8M尿素，1mM DTT，pH 7.4。

8.如权利要求6所述Aβ42修饰蛋白的制备方法，其特征在于：所述纯化洗脱液组成为：20mM Tris，150mM NaCl，500mM咪唑，5M尿素，1mM DTT，pH 7.4。