[发明专利]分离的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3及其抗病毒活性

权利要求书

1.一种分离的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3基因，其特征在于，所述Rhbdd3基因的核苷酸序列是SEQ ID NO：1所示的序列。

2.一种分离的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3，其特征在于，所述蛋白Rhbdd3的氨基酸序列是SEQID NO：2所示的序列。

3.一种包含如权利要求1所述的Rhbdd3基因的重组质粒。

4.一种如权利要求3所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤一、 提取鲤的RNA，反转录所述RNA获得鲤cDNA；

步骤二、 设计Rhbdd3基因序列保守区的上游引物和下游引物，以所述步骤一获得的所述鲤cDNA为模板扩增，得到扩增片段，将其纯化回收并连接至pMD18-T载体上得到连接产物，将所述连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并筛选阳性克隆后，进行双向序列测定，获得Rhbdd3基因序列；

步骤三、 根据所述步骤二得到的所述Rhbdd3基因序列，设计Rhbdd3基因编码区的表达克隆正向引物和反向引物，以所述步骤一获得的所述鲤cDNA为模板扩增得到扩增片段，并将所述扩增片段进行分子克隆，得到重组质粒。

5.如权利要求4所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述步骤三还包括在扩增前，需在所述表达克隆正向引物和反向引物上分别引入Nhe I、EcoR I酶切位点。

6.如权利要求4所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述上游引物和下游引物分别为pMD18-Rhbdd3-F和pMD18-Rhbdd3-R，其中所述pMD18-Rhbdd3-F的DNA序列为ACCTCAATATGACAGCGTCGTAAAC，所述pMD18-Rhbdd3-R的DNA序列为TATCCCTGAGCTATGACGCTGA。

7.如权利要求4所述的重组质粒的制备方法，其特征在于，所述表达克隆正向引物和反向引物分别为pCI-Rhbdd3-F和pCI-Rhbdd3-R，其中所述pCI-Rhbdd3-F的DNA序列为TTAGCTAGCCACCATGCTCGATCATCTTTTTTCAGCAT，所述pCI-Rhbdd3-R的DNA序列为CGGAATTCCTATGACGCTGATGGCTTCTTCC。

8.一种如权利要求1所述的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3基因在制备抗鲤春病毒血症病毒药物组合物或抗传染性胰腺坏死病毒药物组合物中的应用。

9.一种如权利要求2所述的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3在制备抗鲤春病毒血症病毒药物组合物或抗传染性胰腺坏死病毒药物组合物中的应用。

10.一种如权利要求1所述的鲤抗病毒蛋白Rhbdd3基因在培育鱼类抗病毒新品种中的应用。