[发明专利]一种同时测定半夏中7种有机酸的HPLC方法

说明书

本发明提供了一种同时测定半夏中4种有机酸(草酸、L‑苹果酸、枸橼酸和富马酸)的HPLC方法，该方法还能同时检测另外3种有机酸(琥珀酸、顺式乌头酸和反式乌头酸)。本发明的半夏HPLC检测方法，能同时测定半夏药材中的多种有机酸成分，且操作简单，灵敏度高，专属性好，准确度高，可以有效地评价半夏药材的质量。

技术领域

本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种同时测定半夏中7种有机酸的HPLC方法。

背景技术

半夏来源于天南星科半夏属植物半夏Pinellia ternata(Thunb.)breit.的干燥块茎，其在全国大部分地区均有分布，主产于甘肃、四川、贵州、湖北、山西、河北、山东等地，以粒个大、粒圆、皮净、色白、质坚实、粉性足，无花、麻、油子者为佳。半夏在临床上主要以汤剂入药，用于痰多咳喘，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛，呕吐反胃，胸腕痞闷，梅核气；生用外治痈肿痰核。半夏化学成分复杂，具有多种活性成分，现代药理研究表明，半夏中含有的总游离有机酸具有止咳、祛痰、体外抑制肿瘤细胞的作用。

关于半夏药材及其制剂的成分含量测定已有许多报道，但只是测定其中的2～4种成分。众所周知中药的多效性源于其复杂的化学成分，仅靠一两个成分的含量测定不能反映其他成分的情况，难以真正控制其质量。选择更多的成分作为指标进行质量控制研究，更能合理、全面评价半夏药材质量。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种同时测定半夏药材中4种有机酸：草酸、L-苹果酸、枸橼酸和富马酸的HPLC方法。

本发明的半夏中有机酸的HPLC测定方法，包括如下操作步骤：

1)对照品溶液制备：取对照品，溶解，即得对照品溶液；

2)供试品溶液制备：取半夏药材，提取，即得供试品溶液；

3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：190～260nm；流动相：乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液-甲醇-乙腈为流动相B；梯度洗脱程序如下：

其中，步骤1)所述对照品包括：草酸、L-苹果酸、枸橼酸和富马酸对照品。

更进一步地，该方法还能同时检测另外3种有机酸：琥珀酸、顺式乌头酸和反式乌头酸。

其中，步骤1)所述溶解是加入水溶解。

其中，步骤2)所述提取是指：加入水，超声提取，离心，取上清液，加入乙酸乙酯萃取。

其中，步骤2)所述提取方法如下：

取半夏药材，加入药材25～200w/v(g/mL)倍的水，超声提取30～90min，放冷，用水补足减失的质量，滤过或离心(10000r/min，离心5min，取上层清液再离心一次)，精密量取清液5mL，加磷酸(或盐酸)后，摇匀，用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯，减压浓缩至干，残渣加0.1％磷酸溶液使溶解，并定容，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

进一步地，所述提取方法如下：

取半夏药材粉末(过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入药材25w/v(g/mL)倍的水，称定质量，超声提取60min，放冷，用水补足减失的质量，滤过或离心(10000r/min，离心5min，取上层清液再离心一次)，精密量取上清液5mL，加磷酸(或盐酸)0.5mL，摇匀，用乙酸乙酯萃取5次，每次25mL，合并乙酸乙酯，减压浓缩至干，残渣加0.1％磷酸溶液使溶解，并定容至5mL，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。